Исследование биологических макромолекул электрофокусированием иммуноэлектрофорезом и радиоизотопными методами - Остерман Л.А.
Скачать (прямая ссылка):
Этой величиной можно будет воспользоваться для вычисления истинной радиоактивности рабочего препарата, просчитанной в том же самом сцинтилляторе при точно такой же настройке канала: D=NfE.
Величина Е здесь выражена, разумеется, не в процентах, а в долях единицы. В счетчике предусмотрена возможность переключения канала на заранее выполненную (на заводе) настройку для регистрации одного из распространенных изотопов (3Н, 14С, 3Ф). Однако надо помнить, что сцинтиллятор, использованный при заводской настройке, мог быть иным, чем в данном опыте, а от выбора сцинтиллятора эффективность счета зависит довольно существенно.
Настройка двух каналов для счета двух разных изотопов
Пусть в состав исследуемого препарата входят вещества, помеченные тритием и радиоактивным углеродом. Для их выявления необходимо раздельно просчитать радиоактивность 3Н и 14С. Значит, потребуется два канала. Условимся, что канал А настраивают на счет 3Н, а канал В — на счет 14С.
Сначала представим себе всю ситуацию с помощью спектра распределения амплитуд импульсов. Через усилитель проходят и на вход обоих каналов подаются как импульсы, обязанные своим происхождением распаду трития, так и имлульсы углерода. На рис. 62 показано наложение спектров тех н других импульсов. Легко видеть, что в области больших амплитуд (в правой части спектра) проходят только импульсы “С, зато в левой части графика смешиваются импульсы от 3Н и импульсы относительно малой амплитуды из спектра ,4С. Сам счетчик не может различить их, поэтому приходится проделать некоторые вспомогательные операции, чтобы получить возможность расчетным путем оценить вклад каждого изотопа. Для этого потребуются стандарты обоих изотопов. Начинают с более простой операции — настраивают канал.В так, чтобы через него проходили только импульсы 14С, даже если придется примириться с неоптимальной эффективностью их счета. На рис. 62 указано положение порогов, отмеченных индексом соответствующего канала. Положение НПВ выбрано так, что он преграждает доступ в канал В всем импульсам 3Н. Практически это положение находят следующим образом. Устанавливают в прибор стандарт 3Н и поднимают (как было описано выше) нижний порог канала В («углеродного») до тех нор, пока счет в этом канале не прекратится. Оптимальное положение ВПв находят точно так же, как при счете одного изотопа — с помощью стандарта **С.
Затем настраивают канал А. В него неизбежно будут проникать импульсы от иС. Их число ограничивают так, чтобы оно не превышало 10% от полного числа импульсов “С. Для этого устанавливают в прибор стандарт 14С и максимально раздвигают
Рис. 62. Наложение спектров амплитуд импульсов 3Н и ,4С (установка порогов для счета двойной метки)
пороги канала А. Это позволит определить полное число импульсов “С. Затем снижают _ порог ВПА до тех пор, пока
нпА влАнпв BRg^ T,1J гчет “С в канале А («тритие-
вом») не снизится до 10% от
максимального. Положение НПЛ устанавливают так же, как при счете одного изотопа — с помощью стандарта SH. На этом регулировку каналов заканчивают.
Теперь определяют три значения эффективности счета. Во-первых, по стандарту 3Н определяют эффективность счета трития в канале A: EtA=NtA(Dt, Здесь iVTjA— счет стандарта 3Н, регистрируемый в канале A; DT — истинная радиоактивность стандарта 3Н. Во-вторых, точно так же, по стандарту 14С, вычисляют эффективность счета углерода в канале В: EyB=>NyiBIDy. Однако около 10% импульсов углерода просчитываются в канале А, поэтому следует подсчитать эффективность и этого счета. В прибор устанавливают стандарт |4С, а счет смотрят в канале А (не меняя положения порогов!). Используя аналогичные обозначения, расчет производят так: EfiA=NvJDr Значение Е7,А будет заведомо меньше 0,1.
Теперь можно приступить к регистрации двойной метки в препарате и соответствующим расчетам. Не меняя настройки каналов, устанавливают в прибор флакон с препаратом и регистрируют (за вычетом фона) счет в обоих каналах: NA и NB. Индексы «т» и «у» здесь не фигурируют, так как по крайней мере в канале А заведомо просчитываются импульсы от обоих изотопов. С помощью найденных значений эффективностей счета выявляют истинное распределение радиоактивностей.
Содержащуюся в препарате полную радиоактивность |4С легко определить по уровню счета в канале В, где, как мы знаем, считается только углерод: Dr=NB/EyiB. Разумеется, здесь символ Dy обозначает истинную радиоактивность не стандарта, а препарата (не стоит усложнять обозначения для их различения— это легко сделать по смыслу изложения). Зная Dr в препарате, можно подсчитать вклад углерода в суммарный счет, зарегистрированный в канале A: Ny,A—DvEyA. На долю трития приходится остальная часть счета в канале A: NrA=NA—ЛГуА.
Наконец, истинная радиоактивность трития в препарате может быть подсчитана с помощью найденной выше эффективности его счета в канале Л: D?=NttJET:A.
В современном счетчике предусмотрены заводские настройки двух каналов для счета разных пар изотопов (3Н/14С, 5Н/згР и ,4С/32Р), выполненные с использованием определенного фирмен-
