Исследование биологических макромолекул электрофокусированием иммуноэлектрофорезом и радиоизотопными методами - Остерман Л.А.
Скачать (прямая ссылка):
МЕТОД «СЛИВШИХСЯ РАКЕТ»
В отличие от исходного метода «ракет Лорелла», данный метод используется не для количественных определений, а для обнаружения гетерогенности фракций, кажущихся гомогенными при разделении каким-нибудь из неэлектрофоретических методов, например гель-фильтрацией или ионообменной хроматографией.
С помощью шаблона в неширокой полоске свободного от антител геля агарозы вырезают в шахматном порядке большое
Рис* 43. Анализ гомогенности хроматографического белкового пика методом «слившихся ракет» (схе- ¦. .
ма) рч-:-
Пунктир — профиль хроматографяче-* [
ского пика (AieD); сплошные линии—
составляющие его белковые фракции. w Ш ш W т Ъ 9 т щ
выявляемые иммуноэлектрофорезом
Рис, 44, Гетерогенность хроматографического пика, обнаруженная методом «слившихся ракет»
число близко расположенных отверстий (рис, 43). В них вносят из пробирок коллектора аликвоты всей последовательности элюированных с колонки фракций и оставляют их там на 30— 45 мин, с тем чтобы в результате диффузии находящиеся во фракциях белки слились в сплошную картину распределения, соответствующую непрерывному току элюции материала с колонки (отсюда название — «метод слившихся ракет»). Затем оставшуюся часть пластинки заливают агарозой в смеси с по-лиспецифической антисывороткой и проводят электрофорез так же, как при выявлении «ракет Лорелла» или во втором направлении при перекрестном иммуноэлектрофорезе. Как и в последнем случае, благодаря различию в концентрациях и электрофоретических подвижностях антигенов, вышедших из хроматографической колонки в составе одного пика, а также различию в концентрациях специфических к ним антител в антисыворотке эти антигены удается различить и тем самым установить не гомогенность хроматографического пика, если она имеет место, или, наоборот, подтвердить его гомогенность. Результат такого анализа иллюстрирует рис. 44. Из него видно, что в состав исследованного хроматографического пика, кроме основного белка, входит заметное количество белковых примесей.
Гурвич А. Е., Яковлева О. Я,, Г^лш-нова А. Е.— Биохимия, 1961, 26, с. 934—941.
Остерман Л. А. Методы исследования белков и нуклеиновых кислот: Электрофорез и ультрацентрифугирова-ние. М.: Наука, 1981.
Рохлин О. В., Венгерова Г. И.л Иез-лин Р. С,— Молек. биология, 1970,
4, с. 906—917.
Alwine I, С., Kemp D. Stark G. R,— Proc. Nat, Acad. Sci. US, 1977, 74, p. 5350—5354.
Bhakdi S.—J, Biochem. and Biophys.
Meth., 1980, 2, p. 79—90.
Bhakdi S,f Bhakdi-Lehnen B.f Bjerrum O. J.—Biochim. et biophys. acta, 1977, 470, p. 35—44.
Bjerrum O. /.— Anal. Biochem,, 1978, 90, p. 331—348.
Borrebaeck С. A. K., Etzler M. ?.— J. Biol. Chem., 1981, 256, p. 4723— 4725.
Chua N-H.t Blomberg F.— Ibid., 1979, 254, p. 215—223.
Clarke И. G. Mtt Freeman 7\— Prot.
Biol. Fluids, 1966, 14, p. 503—509. Daussant L, Mac Gregor A. W.— Anal.
Biochem., 1979, 93, p. 261—266. Dion A. S., Far well D, C„ Pomenti A. A., Girard A. J.—Proc. Nat. Acad. Sci. US, 1980, 77, p. 1301—1305. Eisenbarth G. S.— Anal. Biochem., 1981, 1(1, p. 1—16.
Erlich H. A., Levinson J. R,f Cohen
5. N.t McDeviit H. О,—J. Biol. Chem.t 1979, 254, p. 12240—12247.
Glad C„ Crubb A. O.— Anal. Biochem., 1981, 116, p. 335—340.
Grabar P., Williams С. A — Biochim. et biophys. acta, 1953, 10, p. 193—194. GtUlfoyle T. /.— Biochemistry, 1980, 19, p. 5966—5972.
Gustafson G. L, Milner L. A— Biochem. and Biophys. Res. Communs,
1980, 94, p. 1439—1444. Huchzermeier R.f Tanenbaum S. W*, Flashner Л1— Anal. Biochem., 1980, 105, p. 454—460.
Hughes E. N., August J. T.— J. Biol.
Chem., 1981, 256, p. 664—671. Immunochemistry: An advanced textbook/Ed. L. E. Glynn, M. W. Steward. Chichester: J. Wiley a. Sons, 1977.
Kaizmann J. A., Nesheim M, E„ Hibbard L. S., Mann K. G.— Proc. Nat. Acad, Sci. US, 1981, 78, p. 162—166,
Kessler R. E.— Anal. Biochem., 1981, 116, p. 129—132.
KUnkert Klein A.t Abdet-Monem
Al—J. Biol. Chem., 1980, 255,
p. 9746—9752.
Kohler G.f MUsiein C.— Nature, 1975, 256, p. 495—497.
Krajewska Al, Briggs R. C., Chiu I.-F., Hnilica L. S.™ Biochemistry, 1980, 19, p. 4667—4673.
Laurell С. B.—Anal. Biochem., 1966, 15, p. 45—52.
Legocki R, P,} Verma D. P. 5.— Ibid., 1981, И1, p. 385—392.
Lee J. S., Lewis /. R,t Morgan T. R.f Singh В.— Nucl. Acids Res., 1981, 9, p. 1707—1721.
Maidment B. W., Papsidero L. D., Ga-marra M, et al — Anal. Biochem.
1981, 111, p. 336—342.
Mueller U. W., Potter /. M.— Ibid., 1979, 100, p. 51—53.
Norrild B,t Bjerrum O. Vestergaard B. F.— Ibid., 1977, 81, p. 432—441.
Nossal C. Jt 1/. Antibodies and immunity. N. Y.: Basic Books Inc., 1978.
Olden K, Yamada К М.— Ibid., 1977, 78, p. 483—490.
Olmsted L В.— J. Biol. Chem., 1981, 256, p. 11955—11957.
Ouchterlony O.— Ark. kemi, 1950, 1, p. 43—50.
Prause J. V.t Sjostrom H.t Noren O., Josefsson L — Anal. Biochem., 1978,. 85, p. 564—571.
Renart Reiser Stark G. R — Proc, Nat. Acad. Sci. US, 1979, 76,