Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Остерман Л.А. -> "Исследование биологических макромолекул электрофокусированием иммуноэлектрофорезом и радиоизотопными методами" -> 55

Исследование биологических макромолекул электрофокусированием иммуноэлектрофорезом и радиоизотопными методами - Остерман Л.А.

Остерман Л.А. Исследование биологических макромолекул электрофокусированием иммуноэлектрофорезом и радиоизотопными методами — М.: Наука, 1983. — 296 c.
Скачать (прямая ссылка): isledovaniebiologicheskihmakromolekul1983.djvu
Предыдущая << 1 .. 49 50 51 52 53 54 < 55 > 56 57 58 59 60 61 .. 140 >> Следующая

антитела, через отверстия входит внутрь конусов, и антитела получают возможность взаимодействовать с сорбированными антигенами (рис. 27, в). Далее пластину с конусами поднимают и жидкость снова стряхивают. На поверхностях конусов остаются иммунные комплексы (рис. 27, г). Теперь можно заливать в конусы раствор меченых вторичных антител (или меченого белка А — см. ниже), там же производить необходимые промывки и, наконец, разрезав пластину ножницами, просчитать радиоактивность, связанную с каждым из конусов, в счетчике 7-излучения [Eisenbarth, 1981].
В аналогичной работе, где получали моноклональные антитела против мембранных белков фибробластов зародыша мыши, для слияния клеток в гибридомы использовали раствор, содержавший 25% ПЭГ и 25% диметилсульфоксида [Hughes, August, 1981]. При сканировании гибридом в качестве твердой фазы использовали сами клетки фибробластов, сшитые в нерастворимый гель с помощью глютаральдегида. Недавно описано получение моноклональных антител к белкам 50 S субъединицы рибосомы Е. coli [Shen et al., 1980].
В опубликованном недавно обзоре приводятся интересные сведения о получении моноклональных антител к ДНК и РНК. Они обладают высоким сродством к своим антигенам и довольно хорошей специфичностью: двунитевую ДНК «отличают» от однонитевой, а рибосомальную РНК «узнают» среди прочих РНК- Там же цитируется ряд работ, в которых были получены моноклональные антитела для опухолевых клеток, несущих на своей поверхности специфические опухолевые антигены. Антиопу-холевые, радиоактивно меченные антитела могут быть использованы для поиска метастазов в организме, в том числе и у человека, поскольку в этом же обзоре приводится устное сообщение о получении продуктивных линий миеломы человека. Соединение моноклональных антиопухолевых антител с цитотоксинами может открыть новую страницу в борьбе со злокачественными новообразованиями. Получены также моноклональные антитела против ряда вирусов, в том числе вируса гриппа. В целом картина бурного развития приложений рассматриваемого метода всего лишь за 5 лет его существования производит сильное впечатление [Eisenbarth, 1981].
В работе Ли и соавторов содержатся первые данные о способности моноклональных антител к нуклеиновым кислотам различать нуклеотидный состав и даже последовательность нуклеиновых оснований; правда, эти данные получены на синтетических полинуклеотидах [Lee et al., 1981].
ПРОДАЖНЫЕ ПРЕПАРАТЫ АНТИТЕЛ
Ввиду того, что антитела очень устойчивы и хорошо хранятся в лиофилизированном виде, большое число фирм наладило иу промышленное производство и поставляет широкий ассорти-
мент специфических антисывороток и очищенных антител. Особенно обширен ассортимент антисывороток у фирм медицинской специализации. Для биохимических исследований антисыворотки поставляют такие широко известные биохимикам фирмы, как «Sigma», «Bio-Rad», «Miles» и др. Предлагаемые ими списки антисывороток не столь обширны и менее специализированы, но все же слишком велики для того, чтобы их здесь цитировать. Приведем лишь несколько примеров наиболее употребительных материалов такого рода: антисыворотки кролика и козы против каждого из иммуноглобулинов человека, их тяжелых и легких цепей, фрагментов FаЬ и Fc> белков комплемента и всевозможных белков крови человека, а также против гормонов; антисыворотки кролика и козы против иммуноглобулинов различных л а-бораторных животных, белков крови этих животных, эритроцитов, вирусов животных, целого ряда ферментов, лектинов и др.; очищенные IgG аналогичной специфичности, в том числе конъюгированные с флюоресцентной меткой (флюоресцеинизотиоциа-натом), пероксидазой, щелочной фосфатазой, ферритином и т. д.
Особенно широкое применение продажные антисыворотки получили в качестве «вторичных антител», как описано ниже.
ОБНАРУЖЕНИЕ И ОЦЕНКА КОНЦЕНТРАЦИИ АНТИТЕЛ
Для контроля за ходом иммунизации животного и для планирования иммунохимических экспериментов необходимо располагать способом обнаружения и оценки содержания в антисыворотке антител, специфических к иммунизирующему антигену* Протекающая на молекулярном уровне реакция взаимодействия антител с антигенами должна приводить к развитию явлений, доступных наблюдению невооруженным глазом. Вовсе не обязательно, чтобы эти явления воспроизводили механизмы защитных реакций организма. Достаточно того, чтобы они определенно указывали на образование специфического иммунного комплекса.
Эту задачу удается решить, опираясь на отмеченные выше факты множественности антигенных детерминантов на поверхности клеток и белковых молекул, а также на наличие двух областей связывания антигенов у каждой молекулы антитела. Можно приготовить такую смесь антител и антигенов в растворе, в которой в результате протекания иммунохимических реакций практически каждый из антигенов окажется связанным с двумя или несколькими молекулами антител, а каждое из антител, в свою очередь, свяжется с двумя антигенами (рис. 28, а). Образуется пространственная сетка чередующихся молекул антигенов и антител, легко выпадающая в осадок.
Предыдущая << 1 .. 49 50 51 52 53 54 < 55 > 56 57 58 59 60 61 .. 140 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed