Исследование биологических макромолекул электрофокусированием иммуноэлектрофорезом и радиоизотопными методами - Остерман Л.А.
Скачать (прямая ссылка):
Gorg A.t Postel W; Westermeier R. et al.— J. Biochem. and Biophys. Meth., 1980, 3, p. 273—284.
Hari V.—Anal. Biochem., 1981, 113, p. 332—335.
Hielmetand L, M.t Nebert D. W.t Chrambach AAnal. Biochem., 1979, 95, p. 201—208.
Hirabayashi 7\— Ibid., 1981, 117,
p. 443—451.
Horejsi V,f Tichd Af.— Ibid., 1981, 116, p. 22—26.
Horst M. N., Mahaboob S., Basha M. et al.—Ibid., 1980, 102, p. 399—408.
Jackie Я.— Ibid., 1978, 98, p. 81—84.
Sackowski G,t Liew С. С.— Ibid., 1980, 102, p. 321—325.
Kuhn 0.f Wilt F. JV.—Ibid., 1980, 105, p. 274—280.
Laas 7\, Olsson I., Soderberg L — Ibid., 1980, 101, p. 499—461.
Le graver end M., Glazer R. /.— Bio-chim. et biophys. acta, 1980, 607, p. 92—101.
O’Farrell P. H.— J. Biol. Chem, 1975, 250, p. 4007—4021.
OrFarrell P. Z., Goodman H. M.f O’Farrelt Я. H.— Cell, 1977, 12,
p. 1133—1142.
ЧАСТЬ ВТОРАЯ
ИММУНОЭЛЕКТРОФОРЕЗ
ВВЕДЕНИЕ
Рассмотрение различных вариантов иммуноэлектрофореза естественным образом завершает начатое еще в предыдущей книге изложение методов фракционирования белков и нуклеиновых кислот в электрическом поле. В любом из вариантов иммуноэлектрофореза обязательно имеет место явление иммуно-преципитации. Это явление широко используется и само по себе — как плодотворный способ высокоизбирательной очистки белков, а также для обнаружения иммуноспецифических продуктов фракционирования, проведенного с помощью обычного электрофореза или ИЭФ. Поэтому «представляется целесообразным предварить рассмотрение собственно иммуноэлектрофореза описанием механизма и особенностей метода иммунопреципитации. Однако многие из этих особенностей, в частности очень важные явления неоднозначности иммунного ответа и полиморфизма иммунных реакций, нельзя понять без хотя бы беглого, но не слишком поверхностного знакомства с механизмом выработки иммунитета, строением и функцией иммуноглобулинов, природой сил взаимодействия между антителами и антигенами и т. д. Эти же представления окажутся необходимыми в следующей части книги при рассмотрении радиоиммунных методов исследования. Между тем в большинстве случаев биохимики и молекулярные биологи довольно плохо знакомы с современной иммунохимией, претерпевающей к тому же пору бурного развития.
Все это оправдывает включение в изложение довольно подробного введения в иммунохимию, которое поможет любому читателю осмыслить и обоснованно применять практические рекомендации по получению и очистке иммунных антисывороток.
В гл. 2 описано применение таких сывороток для иммунологического анализа результатов обычного электрофореза и ИЭФ. Следующие три главы целиком посвящены разбору различных вариантов и возможностей собственно иммуноэлектрофореза, проводимого главным образом в гелях агарозы.
Глава 1
ОСНОВЫ ИММУНОХИМИИ
Методы иммунохимии за последние годы заняли важное место в исследованиях белков и нуклеиновых кислот. Это обусловлено уникальной возможностью обнаружения и выделения индивидуальных белков и нуклеопротеидов из сколь угодно сложной их смеси с помощью специфических «антител», вырабатываемых в организме соответствующим образом иммунизированного животного. Однако эти методы, наряду со своей ни с чем не сравнимой избирательностью, таят в себе и возможности серьезных ошибок. Дело в том, что при реальной постановке эксперимента всегда есть место для сомнения в том, действительно ли используемая популяция антител специфична, тем более что антителам, как будет видно из дальнейшего, иногда присуща определенная «поливалентность», т. е. способность взаимодействовать с различными «антигенами», в частности с различными белками.
Для того чтобы ясно оценить возможности использования такой искусственной системы и характер информации, которую можно при этом получить, следует хотя бы в общих чертах рассмотреть нормальное развитие событий в организме, акцентируя свое внимание на особенностях синтеза, строения и функционирования антител. Разумеется, не следует пытаться здесь проникнуть в глубину огромной и весьма специальной области иммунологии. Предлагаемый ниже очерк имеет своей задачей только ввести читателя в круг изучаемых проблем и помочь ему найти общий язык со специалистами — иммунологами и иммунохимиками.
ЗАЩИТНЫЙ АППАРАТ ОРГАНИЗМА ВЫСШИХ ЖИВОТНЫХ
Компоненты крови
Кровь высших животных, наряду с функциями доставки к клеткам кислорода, питательных веществ и гуморальных факторов регуляции, удаления углекислого газа и продуктов клеточного катаболизма, выполняет еще и важнейшую функцию транспорта средств защиты организма от чужеродных и нередко смертельно опасных вторжений.
Если в пробирку с кровью добавить антикоагулянт (например, гепарин) и подождать, пока плавающие в жидкости клетки сядут на дно, то над массой красных кровяных клеток (эритроцитов) можно будет заметить тонкий белый слой. Это — белые кровяные клетки (лейкоциты). Подробнее мы познакомимся с ними ниже, а сейчас заметим, что лейкоциты крупнее эритроцитов и что по количеству их примерно в тысячу раз меньше.
