Исследование биологических макромолекул электрофокусированием иммуноэлектрофорезом и радиоизотопными методами - Остерман Л.А.
Скачать (прямая ссылка):
белка, может оказаться столь малым, что обеспечить это разобщение не удастся. И наоборот — два легко разделяемых по своим подвижностям белка могут оказаться раздвинутыми излишне широко за счет сжатия всех остальных зон.
Создается впечатление, что для фракционирования белков метод изотахофореза если и привлекателен, то скорее всего не в сфере научных исследований, а как метод рутинного контроля за сохранением пропорций уже известной белковой смеси. Сюда относятся такие важнейшие сферы деятельности, как технологический контроль в пищевой промышленности или диагностика заболеваний по белковому составу физиологических жидкостей организма [Delmotte, 1977]. Немалые возможности открывает изотахофорез и для анализа смесей определенных низкомолекулярных веществ, например, в фармакологии — для контроля синтеза или очистки биологически активных пептидов, при изучении реакций метаболизма, а также в пищевой индустрии—для обнаружения примесей органических кислот и других ингредиентов в пищевых продуктах. Такого рода приложения выходят за рамки этой книги, поэтому изложенным выше мы ограничим свое знакомство с методом изотахофореза, по крайней мере до тех пор, пока он не продемонстрирует более убедительно свою пригодность для исследования белков и нуклеиновых кислот.
jt Л
Когда писались эти строчки, трудно было предположить, что до такой демонстрации остается меньше времени, чем необхо-димо для подготовки рукописи к печати. Однако перед самой отправкой ее в типографию была опубликована исключительно красивая работа Г. И. Абелева и Э. Р. Каримовой, коренным образом меняющая ситуацию с изотахофорезом белков. Излагаем вкратце ее идею и даем ссылку на первоисточник [Абелев, Каримова, 1982].
В обычном варианте изотахофореза вся картина распределения компонентов движется вдоль пластинки. При попытке осуществить фракционирование из большого объема разбавленного препарата выясняется, что формирование последовательности узких белковых зон не успевает завершиться к моменту, когда граница лидирующего иона достигает конца пластинки. Авторам удалось остановить движение картины распределения относительно пластинки, сохранив сущность явления изотахофореза. Для этого они воспользовались «принципом относительности» движения, заставив всю жидкость, заполняющую сетку носителя, двигаться в обратном направлении с точно такой же скоростью, с какой мигрируют ионы обоих буферов и расположенные между ними белковые зоны, разделенные амфолинами. Таким образом картина распределения сохраняется неограниченно долго и белки из любого объема исходного препарата могут собираться в узкие зоны (практически для этого достаточно 4 ч).
Движение жидкости осуществляется за счет эндосмоса в пленке ацетилцеллюлозы, неожиданные особенности которого были обнаружены и использованы в этой работе. Самое замечательное здесь то, что равенство скоростей движения жидкости и миграции зон устанавливается автоматически. Экспериментатору не приходится заботиться об остановке картины распределения — она останавливается сама в результате «игры» сил, создаваемых электрическим полем. Для анализа распределения белков авторы использовали тонкие методы им мунодиффузии и иммуноэлектрофореза и потому назвали свой метод «противоточным иммуноизотахофорезом», но, если этого достаточно, можно ограничиться применением обычных методов окрашивания или авторадиографии, описанных выше для ИЭФ.
ЛИТЕРАТУРА
Абелев Г. М., Каримова Э. Р.— Журн. Всесоюзн. хим. о-ва им. Д. И. Менделеева, 1982, 27, № 4, с. 69—75.
Остерман Л. А. Методы исследования белков и нуклеиновых кислот: Электрофорез и ультра центрифугирование. М.: Наука, 1981.
Allen Rt Е„ Masak К С., McAllister Р. К —Anal Biochem., 1980, 104, p. 494—498.
Anderson №. L„ Hickman В. Ibid., 1979, 93, p. 312—320.
Bang a I. P., Anderion В. Я., Roitt L М.— Ibid., 1978, 89, p. 348—354.
Bishop R,— Sci. Tools, 1979a, 26, p. 2—8.
Bishop R.— Ibid., 1979b, 26, p. 70.
Boyd A-f Spelsberg Т. C.™ Biochemistry, 1979, 18, p. 3679-3690.
Burnett D.f Bradwell A. R>, Ramsden Z). R— Sci. Tools, 1980, 27, p. 19— 20.
Caspers M. L., Posey Y.f Brown R. K*— Anal. Biochem., 1977, 79, p. 166— 180.
Chaputs-Cellier C., Arnaud P.—Anal. Biochem,, 1981, 113, p. 325—331.
Danno G,— Ibid., 1977, 83, p. 189— 193.
Delincee H.t Radota В. /.— Ibid., 1978, 90, p. 609—623.
Delmotie P.— Sci. Tools, 1977, 24, p. 33-41.
Epstein Я. F.f Wolf L A.— Anal. Biochem., 1976, 76, p. 157—169.
Gelsema W. Л, De Ligny С: L.t Van der Veen N. G.— J, Chromatogr., 1979, 173, p. 33—41.
Gianazza E.t Chillemi F., Righetti P. G.— J. Biochem. and Biophys,
Meth., 1980a, 3, p. 135—141,
Gianazza Gelfi Righetti P. G.— Ibid., 1980b, 3, p. 65—75.
Gtometti C. S., Anderson N. G.t Tolt-aksen S, L, Edwards /. Anderson N. L — Anal. Biochem., 1980, 102, p. 47—58.
Goldsmith M. R.f Ratiner E. СKoehler Af. M. D.f Balikov S. R.t Bock S. C.—Ibid., 1979, 99, p. 33—40.
Gorg APost el W*> Wester meter /?.— Ibid., 1978, 89, p. 60-70.
