Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Остерман Л.А. -> "Исследование биологических макромолекул электрофокусированием иммуноэлектрофорезом и радиоизотопными методами" -> 2

Исследование биологических макромолекул электрофокусированием иммуноэлектрофорезом и радиоизотопными методами - Остерман Л.А.

Остерман Л.А. Исследование биологических макромолекул электрофокусированием иммуноэлектрофорезом и радиоизотопными методами — М.: Наука, 1983. — 296 c.
Скачать (прямая ссылка): isledovaniebiologicheskihmakromolekul1983.djvu
Предыдущая << 1 < 2 > 3 4 5 6 7 8 .. 140 >> Следующая

МИГРАЦИЯ БЕЛКОВ В ГРАДИЕНТЕ pH
Проанализируем для начала поведение белковых молекул, которые в некоторый момент времени находятся в таком участке градиента, где рН<р1, т. е. в кислой для этих белков среде. Очевидно, что они заряжены положительно и под влиянием поля должны мигрировать к катоду. До сих пор ничего не было сказано о направлении изменения pH вдоль градиента. Его создают таким образом, чтобы pH увеличивался в направлении от анода к катоду. По мере движения положительно заряженные белковые молекулы будут переходить в области градиента со все более высокими значениями pH. В силу этого их положительный заряд будет уменьшаться, а миграция — замедляться. Однако до тех пор, пока pH окружающей их среды меньше pi, движение будет продолжаться. Молекулы белка остановятся, лишь достигнув участка градиента, где для них рН=р1. Здесь они утрачивают заряд, так что электрическое поле на них больше не действует.
Аналогичный процесс, но происходящий в обратном направлении, будет иметь место для тех же белковых молекул, оказавшихся изначально в области рН>р1. Заряженные отрицательно, они мигрируют в направлении анода и остановятся тогда, когда достигнут того же самого участка градиента (рН=р1).
Таким образом, выявляются сразу две существенные особенности ИЭФ, отличающие его от электрофореза: белки мигрируют с замедлением, а начальный объем препарата не влияет на конечное положение белковой зоны. Белок может первоначально занимать весь объем проводящей жидкости, например весь объем геля, или его можно внести в любой участок градиента pH, причем в любом объеме. Конечный результат будет одинаковым — все молекулы белка, имеющие одно и то же значение изоэлектрической точки, соберутся в узкую зону в том месте градиента, где pH—pL Молекулы разных белков фокусируют* ся в различные узкие зоны — так осуществляется фракционирование белковой смеси по значениям pi входящих в нее белков. Эти зоны будут оставаться очень узкими неограниченно долго,
обходимости вводить эти наполнители для предотвращения конвекции в жидкости, но не более того. Поэтому для ИЭФ используют крупнопористый ПААГ, агарозу и сефадекс. Последний, в отличие от ПААГ, должен быть достаточно мелкопористым, для того чтобы молекулы белка не проникали внутрь его гранул, а мигрировали в жидкости между ними. Размер белковых молекул, как уже упоминалось, вообще не имеет значения для их фракционирования; важно только значение pi. Рассмотрим качественно процесс фракционирования смеси белков в стационарном линейном градиенте pH электропроводящей жидкости, полагая, что характерные для всех белков значения pi лежат внутри этого градиента.
МИГРАЦИЯ БЕЛКОВ В ГРАДИЕНТЕ pH
Проанализируем для начала поведение белковых молекул, которые в некоторый момент времени находятся в таком участке градиента, где pHi<pI, т. е. в кислой для этих белков среде. Очевидно, что они заряжены положительно и под влиянием поля должны мигрировать к катоду. До сих пор ничего не было сказано о направлении изменения pH вдоль градиента. Его создают таким образом, чтобы pH увеличивался в направлении от аиода к катоду. По мере движения положительно заряженные белковые молекулы будут переходить в области градиента со все более высокими значениями pH. В силу этого их положительный заряд будет уменьшаться, а миграция — замедляться. Однако до тех пор, пока pH окружающей их среды меньше pi, движение будет продолжаться. Молекулы белка остановятся, лишь достигнув участка градиента, где для них рН=р1. Здесь они утрачивают заряд, так что электрическое поле на них больше не действует.
Аналогичный процесс, но происходящий в обратном направлении, будет иметь место для тех же белковых молекул, оказавшихся изначально в области рН>р1. Заряженные отрицательно, они мигрируют в направлении анода и остановятся тогда, когда достигнут того же самого участка градиента (рН=р1).
Таким образом, выявляются сразу две существенные особенности ИЭФ, отличающие его от электрофореза: белки мигрируют с замедлением, а начальный объем препарата не влияет на конечное положение белковой зоны. Белок может первоначально занимать весь объем проводящей жидкости, например весь объем геля, или его можно внести в любой участок градиента pH, причем в любом объеме. Конечный результат будет одинаковым — все молекулы белка, имеющие одно и то же значение изоэлектрической точки, соберутся в узкую зону в том месте градиента, где рН=р1. Молекулы разных белков фокусируются в различные узкие зоны •— так осуществляется фракционирование белковой смеси по значениям pi входящих в нее белков. Эти зоны будут оставаться очень узкими неограниченно долго,
Рис. 1, ИЭФ белков скелетных мышц de личных организмов [Bishop, 1979а]
/—бык; 2 — свинья; 3 — камбала; 4 — сайд 5 — треска; градиент pH 3,5—9,5
3 пока сохраняется электрически поле. Конечно, молекулы белка ^ результате тепловой диффузии м< гут случайным образом покида' ^ зону фокусирования, но при это они попадут в слегка более кислу или более щелочную среду, чем т которая соответствует их полис нейтральности. Здесь они будут снова заряжаться и под де( ствием электрического поля возвращаться обратно, в зону ф( кусирования.
Предыдущая << 1 < 2 > 3 4 5 6 7 8 .. 140 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed