Исследование биологических макромолекул электрофокусированием иммуноэлектрофорезом и радиоизотопными методами - Остерман Л.А.
Скачать (прямая ссылка):
Останавливать реакцию, идущую в столь малом объеме, удобнее добавлением ингибитора или разбавлением относительно большим объемом холодного буфера, а уже потом — осаждением с инертным носителем.
6. Иногда тритий в процессе реакции, идущей в водной среде, в результате преобразований субстрата может сниматься и обмениваться с водородом воды. Это можно установить перегонкой и измерением радиоактивности конденсата. В таком случае иногда спасает положение замена равномерно меченного тритием субстрата препаратом, меченным в известных (устойчивых) положениях.
7. УА, указываемая фирмами для своих препаратов, ненадежна. Известны случаи, когда ошибка достигала 500%. Следует проверять УА приобретаемых препаратов (но не по УФ-по-глощению, так как возможно присутствие сильно поглощающих примесей) или пользоваться разбавленными препаратами со столь значительным избытком «холодного» вещества, чтобы УА можно было считать только по нему (см. выше). Разумеется, сам разбавитель должен быть надежно чистым.
8. Наличие радиоактивных загрязнений в исходном препарате можно обнаружить методом изотопного разбавления. В этом случае оно не дает пропорционального уменьшения включения метки.
Следует иметь в виду, что меченые препараты нередко поставляются в 50%-ном этаноле, а некоторые реакции ингибируются присутствием даже малых концентраций этанола (например, матричный синтез РНК).
9. Не следует забывать о радиоактивном распаде не только фосфора и иода, но и трития. Период полураспада для него равен
12 годам, так что длительное хранение исходных препаратов может заметно сказаться на их УА.
10* Для изучения кинетики ферментативных реакций бывает необходимо обеспечить очень быструю их остановку в отбираемых аликвотах. Это можно осуществить, перенося аликвоту на очень сильно охлажденные (почти до температуры жидкого азота) фильтры с последующей сушкой в вакууме без оттаивания перед дальнейшей промывкой. Описано простое приспособление для этой цели [Leech et al, 1978].
1L Хранить препараты, меченные 14С, 35S и 32Р (в наиболее разбавленном для дальнейшей работы виде), следует при максимально низкой температуре. Однако меченные 3Н препараты лучше хранить при 2° и не замораживать, потому что при замораживании в водном растворе препараты концентрируются, а это может ускорить их авторадиолиз. Для более сильных р-излу-чателей концентрирование роли уже не играет — они и в растворе «обстреливают» друг друга достаточно эффективно.
ЛИТЕРАТУРА
Остермая Л. ААдлер В. ВБиби-лашвили Р. ШСавочкина Л. П.} Варшавский Я. М.—Биохимия, I960, 31, с. 398—404.
Airhart J. Kelley Л, Brayden Л Е. et a].—Anal. Biochem., 1979, 96, p. 45— 55.
Albright Et B.f Nowak I. SMunro H. N.— Ibid., 1978, 91, p. 258—263.
Aloyo V. Л-Ibid., 1979, 99, p. 161— 164.
Amster O., Salomon Dtf Zemel 0. et al— Nucl. Acids Res., 1980, 8,
p. 2055—2065.
Arnold Hrff., Siddiqui M. A. Q.— Biochemistry, 1979, 18, p. 647—654.
Bearden Л Biochem. and Bio-
phys. Meth., 1980, 2, p. 34—37.
Benezra Rtf Blankstein L. A., Stollar
В. D.3 Levy S. J. Biol Chem., 1981, 256, p. 6837—6841.
Bhatiacharya S., Sarkar N — Biochemistry, 1981, 20, p. 3029—3034.
Blankstein L, A., Stollar В. D.t Levy S, B.— Anal Biochem., 1980, 104,
p. 168—172.
Bollum F. Л, Chang Lt M. S.— J. Biol Chem., 1981, 256, p. 8767—8770.
Bolton A. ?,— In: Amersham, radiochemical reviews. 1977, (Radioiodi-nation techniques; Rev. N 18).
Bolton A. E.t Hunter W. M — Biochem. J, 1973, 133, p. 529—539.
Bonner W. M.t Laskey Rt Л.— Europ. J. Biochem., 1974, 46, p. 83—88.
Bonner W. М., Stedman J. ?>.—Anal. Biochem., 1978, 89, p. 247—256.
Bray D.t Brownlee S. M.— Ibid., 1973, 55, p. 213—221.
Brinster R. L., Brunner S.f Joseph X.f Levey I. L.— J, Biol. Chem., 1979, 254, p. 1927—1931.
Broome SGilbert W— Proc. Nat. Acad. Sci, US, 1978, 75, p. 2746— 2749.
Bryant M. Ltf Nalewaik R. P., Tibbs К L.t Todaro G* /.— Anal. Biochem., 1979, 96, p. 84—89.
Buisson M„ Reboud A-М., Reboud Л-P.—Ibid.> 1976, 75, p. 656-659.
Burckhardt Л, Birnsttel M. L.— J, Mol Biol., 1978, 118, p. 61—79.
Burckhardt J.t Telford Л, Birnstiel M, L —Nucl. Acids Res, 1979, 6, p. 2963—2971.
В us tin M.t Neihardt N. К¦—Cell, 1979, 16, p. 181—189.
Cantarero 1. A., Butler J. E„ Osborn Л IF.—Anal Biochem,, 1980, 105, p. 375—382.
Chafouleas Л GDedman Л RMini-jaai R. P., Means A. Д.— J. Biol, Chem., 1979, 254, p. 10262—10267.
Chamberlain J. P.— Anal. Biochem., 1979, 98, p. 132—135.
Changas GReem G. H.— J. Biol. Chem., 1979, 254, p. 4233—4237.
Chen Я. Y.t Roe В. A— Anal. Biochem., 1978, 89, p. 45—59-
Cheung A. H.t Bensadoun A.f Cheng
C.-Л—Ibid., 1979, 94, p. 346—357.
Cheung D. T.t Benya P. D., Gorn A., Nimni М. E.—Ibid., 1981, 116,
p. 69—74.
