Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Остерман Л.А. -> "Исследование биологических макромолекул электрофокусированием иммуноэлектрофорезом и радиоизотопными методами" -> 105

Исследование биологических макромолекул электрофокусированием иммуноэлектрофорезом и радиоизотопными методами - Остерман Л.А.

Остерман Л.А. Исследование биологических макромолекул электрофокусированием иммуноэлектрофорезом и радиоизотопными методами — М.: Наука, 1983. — 296 c.
Скачать (прямая ссылка): isledovaniebiologicheskihmakromolekul1983.djvu
Предыдущая << 1 .. 99 100 101 102 103 104 < 105 > 106 107 108 109 110 111 .. 140 >> Следующая

Рис. 72. Простое лабораторное устройство для сушки гелей
/ — тонкая и мягкая резина; 2 — гель; 3 — листок «Whatman ЗММ»; 4 — частая латунная сетка; 5 — воронка Бюхнера; 6 — к водоструйному иасосу
мешка используют жесткую конструкцию пористой подложки для геля, который сверху накрывают слоем тонкой и мягкой резины. Присасываясь вакуумом, резина облегает гель и подложку, обеспечивая необходимое уплотнение. Тот же прием иллюстрирует простое лабораторное приспособление для сушки гелей небольшого размера (рис. 72).
Во избежание растрескивания ПААГ перед высушиванием его следует подержать 30 мин в 10%-ном растворе глицерина. При сушке концентрированных ПААГ желательно подводить вакуум к обеим поверхностям геля. Для этого гель следует накрыть сверху пленкой или пластиной из пористого, но не прилипающего к гелю материала, например из пористого полиэтилена, а затем уже — слоем резины.
При работе с 14С желательно использовать пластины ПААГ толщиной не более 0,4 мм. В противном случае р-частицы из нижних слоев геля, даже после его высушивания, не достигнут рентгеновской пленки. Гели толщиной 0,4 мм и меньше удобно сушить на воздухе, на листке гладкого картона, наклеенного на плексиглас. За 36 ч при комнатной температуре гель высыхает в очень гладкую пленку, что важно для хорошего прилегания к ней эмульсии. Пластинку геля из воды поднимают стеклом и дают ей соскользнуть на картон, к которому гель прочно пристает.
Высушивание гелей агарозы, которое сочетают с выжиманием из них влаги, было описано в части I.
На высушенный гель рентгеновскую пленку накладывают непосредственно. Для улучшения контакта пленки с гелем под крышку кассеты следует подложить прокладку из губчатой резины. Экспозиция при авторадиографии занимает обычно от нескольких часов для 3Ф до нескольких дней и недель для 14С. Радиоактивность трития методом авторадиографии, как правило, не регистрируют ввиду слишком большого поглощения слабых р-частиц 3Н на пути к рентгеновской пленке. Кратковременную экспозицию влажных гелей с 32Р ведут обычно при комнатной температуре, более длительную — на холоду (вплоть до —20°) для уменьшения диффузии материала в геле во время экспозиции. Вести авторадиографию высушенных гелей при пониженной температуре смысла не имеет. Полезно напомнить, что при удлинении времени экспозиции размер пятна на пленке за счет [J-ча-стиц, вылетающих под малыми углами к плоскости геля, увеличивается.
Для авторадиографии используют медицинские, рентгеновские, неэкранированные пленки (в пленках, защищенных инертным экраном, последний бесплодно поглощает энергию |1-ча-стиц). Фирма «Kodak» производит пленки с маркировкой «Kodak, No screen X-ray film», например типа NS-5T. Можно использовать и пленки отечественных марок РТ-1, РТ-2 и РТ-6М. Фирма «LKB» рекламирует новую высокочувствительную пленку «LKB-Ultrafilm». Проявление и фиксацию пленок производят по рекомендациям фирм—изготовителей.
Чтобы составить представление о чувствительности метода авторадиографии, можно указать, что пятно с плотностью радиоактивности |4С в 25 ООО расп./мин на 1 см2 надежно обнаруживается этим методом за 24 ч экспозиции.
Непрямая авторадиография
Этот метод позволяет заметно повысить чувствительность регистрации малых количеств згР, но особенно существенно — ^-из-лучения (1251). Дело в том, что при обычной авторадиографии быстрые (1-частицы радиоактивного фосфора пронизывают рентгеновскую пленку, не отдав всей своей энергии. Это тем более относится к ^-лучам. В методе «непрямой авторадиографии» («indirect autoradiography») энергия покидающих пленку р-ча-стиц или ^-излучения трансформируется в световую. Для этого описанный выше «сэндвич» дополняют еще пластинкой флюоресцирующего экрана, которую накладывают на рентгеновскую пленку по другую ее сторону от геля. Под действием р-частиц или Ч-лучей на экране в местах, расположенных над пятнами и полосами радиоактивности в геле, возникает свечение, которое и регистрируется рентгеновской пленкой. Почернение рентгеновской пленки в этом случае обусловлено суперпозицией двух эффектов прямого воздействия радиации и косвенного — преобразованного в свечение экрана. Используют медицинские экраны для флюороскопии, покрытые вольфраматом кальция (CaW04) или фторхлоридом бария (только для 32Р). Эти экраны в данном случае называют интенсифицирующими. Для фотографирования с них в медицине используют высокочувствительную экранированную пленку. Ее используют и для непрямой авторадиографии, тем более что потери энергии р-частиц 32Р и ^-излучения в защитном экране такой пленки относительно малы. Приведем подробный перечень марок экранированных пленок, поскольку они широко используются и в описанном ниже методе флюорографии. Все они относятся к категории «Screen type X-ray film». Наиболее употребительны пленки фирмы «Kodak»: «Kodak X-Omat R», «Kodak X-Omat Н», «Kodak RP-50», «Kodak XR-5X», «Kodak DX-80». Наряду с ними встречаются марки «Сгопех IV film», «Fuji RX», «Agfa-Gevaert», «Curix RP2». Фотопромышленность ГДР выпускает подходящую пленку под маркой «ORWO-HS 11». Из отечественных пленок для данных целей более всего подходит пленка РМ-1. Заодно упомянем марки интенсифицирующих экранов: «Lightning Plus Intensifying Screen» и «Quanta III Intensifying screen» (фирмы «Du-Pont»), «Fuji Mach 2 Screen» и отечественные экраны химфармзавода им. Семашко марки ЭУ-ВЗ.
Предыдущая << 1 .. 99 100 101 102 103 104 < 105 > 106 107 108 109 110 111 .. 140 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed