Методы исследования белков и нуклеиновых кислот: Электрофорез и ультрацентрифугирование - Остерман Л.А.
Скачать (прямая ссылка):
Пробирки для угловых роторов
Для угловых роторов в основном применяют пробирки четырех размеров (наружных):
РазМеры: . Объем, мл размеры: , Объем, мл
в миллиметрах в дюймах в миллиметрах в дюймах
2,7 x63,5 1/2 x21/2 6,5 25,4 x89 1x31/2 38,5
6 x 76,2 5/8 x 3 13,5 38,1x102 11/2 x 4 94,0
В качестве материала для изготовления пробирок используют нитроцеллюлозу, полиалломер (сополимер этилена и пропилена) и поликарбонат. Полиалломерные пробирки всех указанных размеров выпускаются в двух вариантах: тонкостенные и толстостенные. Последние можно использовать без крышек. Нитроцеллюлоэные толстостенные пробирки выпускаются только для объема 6,5 мл. Поликарбонатные пробирки изготовляют только толстостенными. Для всех размеров производятся, но употребляются редко, пробирки из нержавеющей стали. Фирма MSE использует для изготовления пробирок поликарбонат и полипропилен.
Нитроцеллюлоэные пробирки прозрачны, удобны для наблюдения зон после равновесного центрифугирования, а также
для сбора материала путем прокалывания пробирки со дна или сбоку, непосредственно под зоной. Однако они непрочны и не выдерживают больших нагрузок, поэтому нитроцеллюлозиые пробирки объемом 38,5 мл нельзя использовать в высокоскоростных роторах, отнесенных выше к группе 2, если предполагается работать при скоростях вращения, близких к максимальным. Отметим попутно, что нитроцеллюлоза сорбирует нуклеиновые кислоты, что особенно опасно для разбавленных растворов. С этим можно бороться добавлением балластных нуклеиновых кислот или внесением в среду для центрифугирования саркозила либо додецилсульфата натрия (ДДС-Na). Сорбция нуклеиновых кислот резко ослабляется после вымачив^ия пробирок в течение суток в 0,1 М ЭДТА. По-видимому, в -процессе сорбции участвуют ионы тяжелых металлов из материала пробирок.
Толстостенные поликарбонатные пробирки тоже прозрачны, но для прокалывания непригодны. Как и нитроцеллюлоэные, они не выдерживают автоклавирования, поэтому в случае необходимости их стерилизуют ультрафиолетовым облучением. Наиболее удобные полиалломерные пробирки полупрозрачны, причем тонкостенные можно прокалывать. Их можно автокла-вировать, но не более одного раза. Пробирки из нержавеющей стали нельзя заполнять полностью (ввиду их большой массы), если предполагается работать на максимальных оборотах ротора.
Пробирки любого типа можно использовать для центрифугирования водно-солевых растворов, в том числе для градиентов солей цезия, KI, Nal, а также сахарозы, глицерина, метризами-да, фиколла и перколла (см. главу 5). Вместе с тем следует проявлять осторожность при выборе материала пробирок для центрифугирования кислот, щелочей и органических растворителей. Так, поликарбонат не выдерживает контакта с этими веществами, а в нитроцеллюлозных пробирках можно использовать из органических растворителей лишь толуол и хлороформ. Полиалломерные и полипропиленовые пробирки устойчивы к действию 10%-ных растворов щелочей, 50%-ной СН3СООН, ТХУ, этанола, метанола, изопропанола, диметилформамида и диметилсульфоксида, однако и их нельзя использовать для центрифугирования суспензий, содержащих фенол, толуол, хлороформ, ацетон или диоксан. Для этого пригодны лишь полиэтиленовые пробирки и стаканы с завинчивающимися крышками, которыми комплектуются низкоскоростные центрифуги. Впрочем, и полиэтилен плохо выдерживает контакт с хлороформом; в этом случае, кроме стекла, пригодна только нитроцеллюлоза. Отметим также, что водные растворы гуанидинтиоцианата разрушают поликарбонатные пробирки, но безвредны для полипропиленовых.
Тонкостенные пробирки обязательно, а толстостенные — в большинстве случаев закрывают уплотнительными крышка-
Рнс. 46. Пробирка для углового ротора с крышкой (см. текст)
ми. Они имеют двоякое назначение: препятствуют деформации тонкостенных пробирок под действием центробежных сил и обеспечивают, в дополнение к прокладке крышки ротора, защиту центрифугируемой жидкости от воздействия на нее вакуума камеры. Типичная конструкция крышки показана на рис. 46 (в разрезе) .
Внутрь пробирки свободно входит втулка (/), на которой лежит уплотнительное резиновое кольцо (2). В свободном (несжатом) состоянии оно также свободно входит внутрь пробирки. На \ у выступающий вверх стержень втулки на-
девается колпачок (3), облегающий пробирку снаружи. Колпачок удерживается на втулке гайкой (4), навинчивающейся на стержень втулки. Отсюда следует недопустимость полного свинчивания гайки со стержня, когда втулка находится внутри пробирки, поскольку это приведет к падению втулки в пробирку. Первоначально, в момент надевания крышки на пробирку, гайка ослаблена и несжатая резинка входит внутрь пробирки. Очень важно убедиться, что это действительно произошло, т. е. пробирка уперлась в колпачок. Затем гайку завинчивают, и втулка подтягивается к колпачку. Резиновое кольцо сдавливается, диаметр его увеличивается, оно плотно прижимается к внутренней поверхности края пробирки, обеспечивая герметичность. Тонкость этой, на первый взгляд простой, операции заключается в том, что при завинчивании гайки втулка механически ничем не удерживается от проворачивания. Ему препятствуют только силы трения втулки об резинку и резинки о стенку пробирки, поэтому резинка, втулка и верхняя часть пробирки обязательно должны быть сухими. Нельзя не только смазывать резинку, но и допускать проникновения жидкости к верхнему краю пробирки, поэтому заливать жидкость в пробирку следует так, чтобы она не смачивала ее края; если же это случилось, их надо протереть. Кроме того, пробирку следует заливать только до уровня нижнего края втулки, иначе при установке втулки жидкость поднимется по зазору между втулкой и пробиркой и смочит резинку и край пробирки.
