Методы исследования белков и нуклеиновых кислот: Электрофорез и ультрацентрифугирование - Остерман Л.А.
Скачать (прямая ссылка):
Двумерный электрофорез в ПААГ.......................................... 76
Электрофорез с использованием Тритона Х-100 и цетавлона .... 83
Тритон Х-Ю0........................................................ 83
Цетавлон........................................................... 85
Окрашивание белков в ПААГ.............................................. 88
Кислые красители................................................... 90
Другие красители и методы окрашивания.............................. 94
Флюоресцентные красители . . ................................. 97
Локализация ферментов после электрофореза...................... 101
Локализация белковых полос осаждением ДДС-Na................104
Элюция белков из геля.................................................. 105
Определение радиоактивности белкой после электрофореза в ПААГ . 109
Счет радиоактивности в элюатах белка............................... 109
Растворение ПААГ...................................................НО
Импрегнирование сцинтиллятора в гель............................... 111
Авторадиография....................................................112
Флюорография.......................................................113
Препаративный электрофорез белков...................................... 116
Глава 4
Электрофорез нуклеиновых кислот........................................ 120
Замечания общего характера............................................ 120
Выбор буфера геля и напряженности электрического поля .... 120
Выбор характера геля и его пористости............................. 121
Влияние вторичной структуры ...................................... 123
Маркерные молекулы.................................125
Лидирующие красители ............................................. 126
Электрофорез в мягких условиях........................................ 126
Фракционирование плазмид и фрагментов ДНК......................... 126
Фракционирование РНК.............................................. 128
Электрофорез в денатурирующих гелях................................... 128
Щелочные гели..................................................... 129
Гели, содержащие мочевину. Секвенирование ДНК и РНК ... 131
Денатурирующие гели с формамидом.................................. 135
Денатурирующие гели с формальдегидом.............................. 138
Гели, содержащие гидроокись метилртути............................ 140
Денатурация нуклеиновых кислот глиоксалем . . . .......... 142
Использование градиентов пористости ПААГ.............................. 142
Двумерный электрофоре^ нуклеиновых кислот и их фрагментов ... 144
^Некоторые особые случаи электрофореза нуклеиновых кислот . . . , 147
Электрофорез в геле агарозы тройного комплекса ДНК—-РНК-поли-мераза—РНК........................................................ 147
Выявление мРНК при электрофорезе суммарной РНК в геле агарозы 148
Использование жидкого (не сшитого) ПААГ........................... 149
Окрашивание нуклеиновых кислот после электрофореза ...... 150
флюция нуклеиновых кислот из гелей....................................153
Элюция из ПААГ за счет диффузии...................................153
Элюция из гелей агарозы........................................... 154
Электрофоретическая элюция........................................153
Перенос нуклеиновых кислот из геля на нитроцеллюлозные фильтры
и диазобумагу..................................................... 1®“
Определение радиоактивности........................................... 1®
Препаративный электрофорез нуклеиновых кислот.........................166
Литература............................................................ 16®
Часть вторая УЛЬТРАЦЕНТРИФУГИРОВАНИЕ
Введение.............................................................. 174
('лава 1
Основные понятия теории седиментации..................................175
Глава 2
Ультрацентрифуга.............................................. 177
Принцип действия и расположение важнейших узлов.......................177
Проверка готовности основных систем к пуску...........................179
Пуск центрифуги ......................................................180
Глава 3
Роторы и пробирки..................................................... 182
Угловые роторы........................................................182
Пробирки для угловых роторов .....................................184
Уход за роторами и пробирками.....................................187
1Роторы со свободно подвешенными пробирками (бакет-роторы) . . . 189
