Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Остерман Л.А. -> "Методы исследования белков и нуклеиновых кислот: Электрофорез и ультрацентрифугирование" -> 123

Методы исследования белков и нуклеиновых кислот: Электрофорез и ультрацентрифугирование - Остерман Л.А.

Остерман Л.А. Методы исследования белков и нуклеиновых кислот: Электрофорез и ультрацентрифугирование — М.: Наука, 1981. — 288 c.
Скачать (прямая ссылка): elektroforeziultracentrifiguriya1981.djvu
Предыдущая << 1 .. 117 118 119 120 121 122 < 123 > 124 125 126 127 128 129 .. 130 >> Следующая

Концентрация Коэффициент Плотность, г/см* Вязкость, сП
m/V, % моль'л преломления при 5° при 20* при 5* при 20*
10 0,127 1,3483 1,056 1,051 2,0 1,3
20 0,253 1,3646 1,111 1,106 2,9 1,6
30 0,380 1,3809 1,166 1,161 4,0 2,3
40 0,507 1,3971 1,221 1,216 6,7 3,6
50 0,638 1,4133 1,276 1,271 11,9 6,0
60 0,760 1,4295 1,331 1,326 25,0 11,0
7о 0,887 2,4458 1,386 1,381 59,0 26,0
80 1,014 2,4620 1,440 1,436 150,0 58,0 -
Для вычисления плотности раствора метризамида через его коэффициент преломления, измеренный при 20° (л20), можно
пользоваться следующими соотношениями: р5=3,453п20— 3,601; р2О=3,350я20—3,462. Концентрация, выраженная в виде процентного отношения массы метризамида к объему раствора (m/V,%), связана с коэффициентом преломления следующим образом: С=613,5/г20—817.
Из приведенных данных видно, что плотность растворов метризамида мало зависит от температуры, в то время как для вязкости зависимость от температуры очень значительна.
Метризамид в отличие от сахарозы и тем более, солей, связывает очень мало воды. Этим обусловлена высокая степень гид-
1,12 60S субъединицы рибосом
1,15 (+Mg*+) 1,31
1,17 40S субъединицы рибосом
1,22---1,27 ( + Mg2+) 1,2.3
1,25 80S рибосомы (+Mg2+) 1,30
Полисомы (+ Mg2+) 1,30
1,2 Мембраны 1,14---1,26
1,18-1,24 Митохондрии 1,14
Лизосомы 1,14
1,21
1,22
ратании и, соответственно, низкие значения плавучей плотности нуклеиновых кислот в растворах метризамида (в г/см3):
Нативная ДНК Денатурированная ДНК РНК Белки Гликоген
Хроматин (высокомолекулярный)
Хроматин после обработки микрококковой нуклеазой 60S субъединицы рибосом (+ ЭДТА)
40S субъединицы рибосом (+ЭДТА)
Гидратация белков не столь сильно выражена, как в случае нуклеиновых кислот, поэтому значения плавучей плотности белков в растворах метризамида примерно такие же, как в растворах сахарозы. О степени гидратированности нуклеиновых кислот можно судить по тому, что их собственная плотность близка к 2 г/см3 [Cohen, Eisenberg, 1968]. Можно себе представить, какое количество воды прочно связывается с молекулами нуклеиновой кислоты, если их плавучая плотность падает до значений
1,12—1,17 г/см3. Плавучая плотность и степень гидратации нуклеиновых кислот даже в концентрированных растворах метризамида практически такие же, как в воде. Зато в этих условиях существенный вклад в плотность макромолекул вносят связанные с ними катионы. Это хорошо видно на примере связывания магния с рибосомами и их субъединицами — плотность становится значительно выше, чем даже у чистого белка. Любопытно, что, согласно этим данным, магний связывается в основном с 60S субъединицей рибосомы. Отметим также, что фрагментирование хроматина микрококковой нуклеазой дает набор фрагментов разной плотности, что означает разделение хроматина на участки, связанные с разным количеством белка.
Сопоставляя данные по плавучим плотностям со значениями плотности растворов метризамида, легко видеть, что плавучие плотности всех перечисленных биологических объектов перекрываются относительно умеренными концентрациями водных растворов метризамида. Вместе с тем высокая плотность самого метризамида (2,17 г/см8 — за счет трех атомов йода) придает ему способность, подобно CsCl или KI, образовывать градиент плотности при длительном центрифугировании и большой скорости вращения ротора. Отсюда вытекает возможность использования водных растворов метризамида в качестве среды для равновесного центрифугирования в градиентах плотности. Малая плавучая плотность биополимеров в растворах метризамида, его химическая инертность и отсутствие диссоциирующего воздействия дают ему преимущества по сравнению с солевыми растворами.
Но есть и недостаток — относительно высокая вязкость растворов метризамида. Градиент его плотности при центрифугировании образуется медленно. Растворы метризамида при концентрации более 40% настолько вязки, что их вносят не пипеткой, а шприцем.
Градиент плотности метризамида следует преформировать ступенчато за сутки до опыта, для того чтобы ступени имели возможность сгладиться за счет диффузии. Зато эти градиенты хорошо сохраняют свой профиль. Например, преформированный градиент метризамида может сохранять линейность (не отвечающую его равновесному распределению) в течение десятков часов центрифугирования.
В угловом роторе, где длина градиента мала, можно обойтись без преформиравания. Форма равновесного градиента плотности раствора 'метризамида получается довольно сложной, близкой к экспоненциальной (из-за вмешательства вязкости). Иногда она оказывается слишком крутой, поэтому предпочитают преформировать неравновесный линейный градиент, и воспользоваться его устойчивостью для сравнительно непродолжительного центрифугирования.
Предыдущая << 1 .. 117 118 119 120 121 122 < 123 > 124 125 126 127 128 129 .. 130 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed