Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Остерман Л.А. -> "Методы исследования белков и нуклеиновых кислот: Электрофорез и ультрацентрифугирование" -> 103

Методы исследования белков и нуклеиновых кислот: Электрофорез и ультрацентрифугирование - Остерман Л.А.

Остерман Л.А. Методы исследования белков и нуклеиновых кислот: Электрофорез и ультрацентрифугирование — М.: Наука, 1981. — 288 c.
Скачать (прямая ссылка): elektroforeziultracentrifiguriya1981.djvu
Предыдущая << 1 .. 97 98 99 100 101 102 < 103 > 104 105 106 107 108 109 .. 130 >> Следующая

Таблица 2. Характеристики бакет-роторов с длинными пробирками
Рвтор гмнн, г макс, г макс jr мин Максималь- Ем Число Длина
CM см ное'центро- кость проби пробир
бежное ус пробир рок ки, мм
корение, g ки, мл
SW25,2 6,7 15,2 2,27 107000 60,0 3 89
SW27 (SW28) 7,5 16,1 2,14 131000 38,5 6 89
SW27.1 (SW28.1) 6,8 16,8 2,15 135 000 17,0 6 102
SW40 Ti 6,7 15,9 2,37 284 000 14,0 6 95
SW41 Ti 6,6 15,2 2,30 286 000 13,2 6 89
.
(с интервалами в 15%) обеспечивают, как будет видно из дальнейшего, почти изокинетический характер градиентов. Три других (с интервалами в 25%) обусловливают значительное замедление оседания частиц по мере их приближения ко дну пробирки. Условия для проведения опыта с использованием других диапазонов концентраций можно приближенно оценить путем соответствующей интерполяции предлагаемого набора номограмм.
Выберем два наиболее удобных значения температуры: 5 и 20°. Для плавучей плотности частиц можно ограничиться тремя значениями: 1,3, 1,4 и 1,5 г/см3. Из приведенных выше данных следует, что значения р для любых белков и нуклеиновых кислот лежат вблизи одного из этих значений. Выбор плотности, как будет видно далее, не сильно влияет на характер соответствующих кривых. В оценочных расчетах вполне можно принимать, что для белков р=1,3 г/см3, для ДНК—1,4, а для РНК—1,5.
На первый взгляд, серьезные затруднения должны возникнуть ' ввиду разнообразия набора бакет-роторов. Однако если ограничиться роторами с длинными пробирками («Beckman-Spinco»), которые разработаны именно для фракционирования в градиенте плотности, то окажется, что гмян и гмакс у них меняются незначительно (табл.2).
Еще меньше изменяется отношение гма110/лмин, определяющее диапазон значений г/г„ив в выражении для а (от 1 до rMaltc/rM„„). Это позволяет провести все построения для одного «обобщенного» ротора, достаточно хорошо представляющего любой из приведенных в таблице. Примем для него значение гмавс/гм11„=2,25. Для расчетов разобьем градиент на пять частей, выбрав следую-
Рис. 58. Изменение скоростей оседания частиц по длине пробирки при центрифугировании в различных градиентах плотности растворов сахарозы (см. текст)
а — 5—20%; 6-5-30%; в 10—25%;
?* — 10—35%; д — 15—30%; с~\ 5-40%; иерхпие пучки кривых — при температуре 20°, мижнис —5°; верхняя кривая каждого пучка соответствует плотности 1,5, средняя — 1,1, нижняя — 1,3 г/см3
щи с значения г/гшш: 1,0; 1,25; 1,5; 1,75; 2,0 и 2,25. Сферичностью дна пробирки для этих оценочных расчетов можно пренебречь.
Теперь в пашем распоряжении имеются все данные для построения номограмм зависимости величины а от местоположения частицы и характера градиента сахарозы. Местоположение частицы будем характеризовать отношением x/L (х—расстояние, пройденное частицей от мениска, L — длина пробирки). Величина а входит в простое выражение, описывающее изменение скорости оседания частицы при ее движении вдоль градиента: v = = 4-10~6 s20^N2rMlula. Константа седиментации частиц при выборе режима центрифугирования предполагается известной (хотя бы ориентировочно). Значение гшш определяется выбором ротора (табл. 2). Значение N (в тысячах оборотов в минуту) задает экспериментатор. Существенно, что ни одна из этих трех величин не зависит от характера градиента сахарозы и положения частицы в пробирке. Поэтому ход кривых для а на номограммах (рис. 58) описывает характер изменения скорости движения частицы вдоль выбранного градиента в любом из перечисленных выше роторов, независимо от размеров этой частицы (ее константы седиментации) и числа оборотов центрифуги. Эти вспомо-
!) L '1 А
8 Л. А. Остерман
225
гательные номограммы не нужны для выбора параметров (скорости и продолжительности) центрифугирования, поэтому они даны в мелком масштабе. Однако их качественное сопоставление позволяет уяснить многие особенности оседания частиц в различных градиентах сахарозы и сделать ряд важных выводов.
1. Ни один из градиентов не является строго изокинетическим (ему бы отвечала горизонтальная прямая). Вместе с тем изменения скорости для относительно пологих градиентов, с интервалом концентраций в 15%, невелики (жирные линии). Во всех случаях при таком интервале скорость движения частиц от мениска сначала несколько повышается за счет увеличения радиуса, затем немного снижается за счет нарастания вязкости раствора. В целом эти два фактора компенсируют друг друга, и скорость оседания частиц у дна пробирки примерно такая же, как у мениска жидкости.
2. Для относительно крутых градиентов (с интервалом в 25%) скорость оседания частиц снижается за счет быстрого нарастания вязкости почти по всей длине градиента, За исключением небольшой области вблизи мениска. У дна пробирки скорость оседания частиц примерно в 2 раза меньше, чем у мениска.
Предыдущая << 1 .. 97 98 99 100 101 102 < 103 > 104 105 106 107 108 109 .. 130 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed