Происхождение предбиологических систем - Опарин А.И.
Скачать (прямая ссылка):
Были найдены различные аминокислоты. Характерно, что хотя в разных опытах их соотношение варьирует, однако в большинстве случаев основными компонентами являются аланин, глицин и серии. Так, например, в одном из опытов установлено следующее приближенное соотношение аминокислот (в молях): аспарагиновая кислота —2, треонин —4, серин — 14, глутаминовая кислота — 1, глицин — 16, аланин — 14, изолейцин — 2, лейцин—2 и лизин — 4.
II. ДОКАЗАТЕЛЬСТВО НАЛИЧИЯ ВЕЩЕСТВА ПЕПТИДНОЙ
ПРИРОДЫ
После опрыскивания хроматограмм нингидрином некоторые из них были подвергнуты хлорированию и обработке иод-крах-мальным методом для обнаружения пептидной связи. Некоторые из пятен, проявляемых нингидрином, давали также положительную реакцию на иод-крахмальную пробу. Два таких пятна расположены ниже наиболее подвижной аминокислоты (лейцина). Предварительно были предприняты попытки разделить аминокислоты и более сложные вещества на колонке с ионообменной смолой дауэкс 1 х 2 (размер колонки 1 х 150 см). При помощи указанного метода удалось получить около 16 фракций. Хроматографический анализ проб элюатов, находящихся в области пика (эти фракции дают наиболее интенсивную окраску с нингидрином и при проведении пробы Фолина — Лоури), показал, что все исследуемые фракции представляют собой смеси. Как правило, количества материала в указанных фракциях были слишком малы для проведения повторного фракционирования. Поэтому нам пришлось разработать иные подходы.
Были предприняты попытки разделения динитрофенильных (ДНФ) производных обнаруженных соединений. Для этого из колбы описанного выше прибора отбирали 400—500 мл жидкости, обесцвечивали ее, используя норит А (из расчета 25 мг древесного угля на 1 мл жидкости). После отделения древесного угля фильтрованием фильтрат выпаривали под вакуумом. Осадок растворяли в 60 %-ном этаноле, pH доводили до 8,5 (с помощью NaOH) и добавляли динитрофторбензол — ДНФБ. Снова доводили pH до 8,5 и оставляли реакционную смесь на 2—3 час в темноте, причем время от времени pH раствора доводили до нужного значения. По окончании реакции образовавшиеся продукты разделяли путем экстракции и получали эфирную, этилацетатную и водную фракции. Результаты хроматографического разделения на бумаге показали, что в эфирном экстракте содержатся ДНФ-производные аспарагиновой кислоты, серина, глицина, треонина и аланина. Это говорит о наличии указанных свободных аминокислот в исходной смеси. Полученные данные подтверждают результаты исследования, проведенного при помощи аминокислотного анализатора «Спинко». В этил-ацетатной фракции, содержащей, по-видимому, мелкие пептиды, обнаружено несколько продуктов желтого цвета, разделяющихся при хроматографировании. Однако идентифицировать их не удалось ввиду того, что они присутствуют в малых количествах. При хроматографировании водного экстракта (в котором, очевидно, присутствуют ДНФ-пептиды большего молекулярного веса и продукты, не реагирующие с ДНФБ) в системе амиловый спирт — аммиак
выявляется одна узкая желтая полоса и одна широкая полоса вещества, взаимодействующего с нингидрином и дающего положительную иод-крахмальную пробу. Далее проводили элюирование желтой полосы; элюат подвергали хроматографическому разделению на бумаге в системе бутанол — уксусная кислота — вода. В результате были получены две желтые полосы. Наиболее интенсивно окрашенную из них элюировали; элюат гидролизовали в 6 н. НС1 в течение 24 час. Из экстракта не удалось извлечь эфиром ДНФ-аминокислоту. Этот факт указывал на то, что концевая аминокислота, подобно аргинину, является основной аминокислотой. Указанную аминокислоту отделяли от свободных аминокислот путем хроматографирования на колонке с амберлитом 1RC-50 и сравнения ее подвижности с подвижностью ДНФ-аминокислот, использованных в качестве свидетелей. Сравнительное изучение показало, что обнаруженная аминокислота не является аргинином и, по-види-мому, не относится к обычным аминокислотам. В настоящее время она остается неидентифицированной. Свободные аминокислоты гидролизата исследовали при помощи анализатора «Спинко». Обнаружены глицин и изолейцин в соотношении 2:1. Полученные данные, очевидно, указывают на наличие пептида, в состав которого входят три разные аминокислоты. Указанный пептид имеет на N-конце необычную аминокислоту; число содержащихся в нем остатков глицина и изолейцина неизвестно.
В другом опыте при помощи аналогичных методов исследования был обнаружен полимер, содержащий аминокислоты. Как показал анализ, в его состав входят глицин и аланин в соотношении
5 : 1, а также следы изолейцина.
III. ОБРАЗОВАНИЕ ИОНА ЦИАНИДА И СОЕДИНЕНИЙ, СОДЕРЖАЩИХ ОРГАНИЧЕСКИЙ АЗОТ
Было высказано предположение, что неорганический азот присутствует главным образом в форме аммонийных солей, поскольку в жидкости, образовавшейся в колбе прибора, было обнаружено большое количество аммиака. Поэтому по разнице в содержании аммонийного азота, определяемого в отогнанных пробах до и после обработки серной кислотой, можно судить о количестве органически связанного азота. Азот определяли с помощью реактива Несслера (колориметрический метод). Оказалось, что в пробах, взятых из искрового прибора, после упаривания под вакуумом содержится лишь очень небольшое количество неорганического азота. В то же время для них характерно значительное содержание общего азота (определение по микрометоду Кьельдаля), возрастающее с увеличением продолжительности опыта. Поразительным ока-
