Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Опарин А.И. -> "Происхождение предбиологических систем" -> 121

Происхождение предбиологических систем - Опарин А.И.

Опарин А.И. Происхождение предбиологических систем — М.: Мир, 1999. — 463 c.
Скачать (прямая ссылка): proishogdeniepredbiologicheskihsistem1999.djvu
Предыдущая << 1 .. 115 116 117 118 119 120 < 121 > 122 123 124 125 126 127 .. 182 >> Следующая

Для того чтобы получить полинуклеотиды большого молекулярного веса, нужно поддерживать максимально высокую концентрацию нуклеотидов; поэтому следует избегать разбавления реакционной смеси растворителем. С другой стороны, по крайней мере до конца реакции должна сохраняться гомогенность среды. Добавление небольших количеств mpuc-диметиламида фосфорной кислоты — ОР[Ы(СНз)2]з—уменьшает вязкость МФЭ и обеспечивает растворение нуклеотидов; другие растворители в большинстве случаев подавляют процесс. Иногда бывает трудно растворить нуклеотиды непосредственно в МФЭ. В таких случаях мы высушивали замораживанием нуклеотиды в высоком вакууме (лиофилизация). Образующийся рыхлый осадок легко растворяется в МФЭ. В некоторых опытах для получения гомогенного раствора производили обработку ультразвуком при интенсивном охлаждении.
Структурный анализ полинуклеотидов, синтезированных с помощью МФЭ, еще не завершен. Полученный продукт представляет собой смесь компонентов различного молекулярного веса. Низкомолекулярные олигонуклеотиды разделяли методом хроматографии на колонках из сефадекса или ДЭАЭ-целлюлозы. В некоторых
опытах небольшие молекулы и гидролизованный МФЭ удаляли путем диализа, а оставшиеся высокомолекулярные полинуклеотиды характеризовали по скорости диффузии и седиментации. Недиализуемая фракция составляла около 10% исходного материала. Она содержала полимеры с константами седиментации от 1,4 до 2,4 S, что соответствует молекулярному весу около 10 000. Оказалось возможным выделить фракции с большим молекулярным весом.
В природных полинуклеотидах фосфатные группы образуют связь между углеродами в 3'- и 5'-положепии. При полимеризации
до 20 мл
Фиг. 3. Фракционирование синтетической поли-У иа сефадексе G 25 до и после обработки диэстеразой змеиного яда.
дезоксирибонуклеотидов вместо такой обычной связи образуется пирофосфатная связь. В настоящее время неизвестно, можно ли избежать этой нежелательной реакции.
Продажные препараты рибонуклеотидов содержат в основном смесь 2'- и З'-нуклеозидфосфатов. Свободные гидроксилы, стоящие рядом с фосфатной группой, расщепляют пирофосфатную связь, образуя 2', З'-фосфаты. Поэтому в синтетической полиуридило-вой кислоте не обнаруживается пирофосфатных связей. Но, с другой стороны, свободные гидроксильные группы могут способствовать образованию нежелательных 2',2'- и 3',3'-фосфатных связей и оказаться местами ветвления. В полимере, полученном из 2'(3')-уридиловой кислоты, количество фосфатных связей в 5'-положе-нии можно определить с помощью фосфодиэстеразы змеиного яда, специфичной для фосфатной группы в 5'-положении. На фиг. 3
показаны результаты фракционирования полиуридиловой кислоты (поли-У) на сефадексе G25 до и после обработки змеиным ядом. Ясно видно, что имеется значительное количество связей, устойчивых к действию змеиного яда и, следовательно, локализованных не в 5'-положении.
Относительное количество фосфатных групп в З'-положении можно оценить при помощи рибонуклеазы, расщепляющей только те полинуклеотиды, в которых в 2'-положении стоит свободная ОН-группа, а фосфатный мостик находится в З'-положении. Из продажного препарата 3'(2')-уридиловой кислоты был получен полимер, расщепляющийся под действием рибонуклеазы лишь в незначительной степени. Лучшие результаты были достигнуты при использовании полимеров, синтезированных из очищенной З'-ури-диловой кислоты. Устойчивость нуклеотидов к действию рибонуклеа-азы может быть обусловлена либо тем, что фосфатная группа мигрирует из положения 3' в положение 2', либо тем, что замещается •свободный гидроксил в 2'-положении. Для выяснения этого вопроса нужны дополнительные опыты.
Кочетков и сотр. [2] провели недавно изучение полимеризации нуклеотидов, осуществленной с помощью МФЭ. В их опытах приближенный молекулярный вес полинуклеотидов был порядка 10 ООО (точных измерений не проводилось). На основании результатов ферментативного и щелочного гидролиза авторы пришли к выводу, что большая часть связей в природных полинуклеотидах •отличается от связей в синтетических соединениях. Эти данные противоречат результатам, полученным в нашей лаборатории. Одной из причин расхождения может быть то обстоятельство, что исходный материал, использованный советскими авторами, содержал значительные примеси 2'-нуклеотидов, устойчивых к действию рибонуклеазы.
Маттеи (личное сообщение) сравнивал кодирующую активность •синтезированного нами поли-У с препаратом поли-У, полученным с помощью фосфорилазы. Включение фенилаланина определяли в бесклеточной системе Escherichia coli. Поскольку низкомолекулярные полинуклеотиды неактивны и даже обладают ингибирующим действием на процесс, было произведено фракционирование препаратов. Фракции синтетического и ферментативного препаратов поли-У одинакового молекулярного веса обладали приблизительно одинаковой кодирующей активностью. Следовательно, синтетический поли-У, по-видимому, довольно близок по структуре к природному продукту. Дальнейшие исследования должны показать, можно ли повысить специфичность процесса полимери зации.
Предыдущая << 1 .. 115 116 117 118 119 120 < 121 > 122 123 124 125 126 127 .. 182 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed