Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Ньюсхолм Э. -> "Регулфяция метаболизма " -> 154

Регулфяция метаболизма - Ньюсхолм Э.

Ньюсхолм Э., Старт К. Регулфяция метаболизма — М.: Москва, 1977. — 407 c.
Скачать (прямая ссылка): regulyaciyametabolizma1977.djvu
Предыдущая << 1 .. 148 149 150 151 152 153 < 154 > 155 156 157 158 159 160 .. 167 >> Следующая

Таблица .53
Содержание адениннуклеотндов в печенн крыс при голодания . ч и аллоксаиовом диабете1
Содержание в печенн, мкмоль/г сырого веса
Состояние крысы АТФ АДФ АМФ АТФ/АДФ АТФ/ЛМФ
Кормленые ,2,45 0,760 0,130 3,2 18,8
Г олодаиие (в течение 1,78 0,778 0,155 2,2 11,7
24 ч)т (в течение 1,86 ’ 0,825 0,184 2,3 . 10,4
Голодание
48 ч)
Аллоксановый диабет 2,33 , 0,889 0*230 2,6- 10,1
1 Образцы, печени были заморожена in ,situ
Другой способ проверки этой гипотезы заключается в определении общего содержания АТФ в печени в контроле и при кетозе. В состоянии кетоза содержание АТФ в печени снижается примерно-на 15% (табл. 53). Поэтому если при кетозе цитрат-синтаза ингибируется под влиянием АТФ, то концентрация АТФ в митохондриях должна, по-видимому, обязательно увеличиваться, а в цитоплазме—-снижаться. Более того, необходимо допустить, что содержание АТФ в митохондриях настолько меньше его концентрации в цитоплазме, что именно последняя определяет в основном суммарное содержание АТФ в клетке.
Удовлетворительная интерпретация этих трех гипотез о механизме регуляции активности цитрат-синтазы возможна лишь на основе данных о распределении метаболитов между митохондриями и цитоплазмой в интактных клетках печени. В .настоящее время такие экспериментальные исследования неосуществимы методически. Приходится констатировать, что углубление наших знаний в области биохимии обмена веществ целиком зависит от решения этих методических проблем.
ПРИЛОЖЕНИЕ 7.1.
ОТНОШЕНИЕ [НАД+]/[НАД• Н] В ЦИТОПЛАЗМЕ И МИТОХОНДРИЯХ КЛЕТОК ПЕЧЕНН
а) Определение отношения [ЯЛД+]/]ЯЛД-//§
Лактатдегидрогеназа, локализованная в клетках печени исключительно в цитоплазме, катализирует следующую реакцию:
Лактат + НАД+ ч > Пируват + НАД • Н + Н+.
Поскольку активность этого фермента в печени очень высока, можно полагать, что лактатдегидрогеназа катализирует реакцию, близкую к равновесию. Поэтому можно приближенно считать, что выполняется следующее соотношение:
v [Пируват] • [НАД ¦ Н]
АЛДГ— {Лактат]-[НАД+] '
где /Слдг — кажущаяся константа равновесия лактатдегид-рогеназной реакции при pH 0. Следовательно,
[НАД+] [Пируват] 1 [НАД-Н1 [Лактат] ' /Слдг г
Поскольку содержание лактата и пирувата может быть определено в замороженных образцах печени, а значение /Слдг Измерено in vitro (гл. 1, приложение 1.1), то отношение [НАД4-] / [НАД-Н] в цитоплазме может быть подсчитано. Эта величина равна 725 для печени сытых крыс и снижается до 528 и 208 соответственно при голодании и аллокса-новом диабете [34].
3-оксибутиратдегидрогеназа и глутаматдегидрогеназа в клетках печени локализованы исключительно в митохондриях, где они катализируют следующие реакции:
3-оксибутират -(- НАД+ ,< — ь Ацетоацетат -f- НАД-Н + Н+,
Глутамат -f- НАД+ т: К Кетоглутарат + НАД Н + Ht -f- NHS.
Активность обоих ферментов в печени высока, и поэтому считается, что они катализируют реакцию, близкую к равновесию. Это позволяет считать приближенно верным следующее соотношение:
к _____ [Ацетоацетат] • [НАД • Н]
Лобд [4-оксибутират]• [НАД+] • * ’ '
Отсюда
НАД4- ___ [Ацетоацетат]_____1
НАД-Н [3-оксибутират] * Кобд *
где Лобд —кажущаяся константа равновесия реакции при pH 0. Аналогичным образом
гг- __ [Кетоглутарат] • [НАД • Н] • [NH3] 0\
Лгдг— [Г лутамат] ¦ [НАД+] к ' >
и
[НАД*-] __ [Оксоглутарат] • [NH3] 1
[НАД-Н] [Глутамат] * /Сгдг ’
где Кглг — кажущаяся константа равновесия реакции при pH О1.
Поскольку концентрации окислительно-восстановительных пар и аммиака можно определить в образцах замороженной печени, а константы равновесия для упомянутых выше реакций измерить in vitro, то отношение [НАД+]/[НАД-Н] в митохондриях можно рассчитать. Такие расчеты отношения ['НАД+]/ [НАД-Н] в митохондриях печени, проведенные для 3-оксибутиратдегидрогеназной реакции, дают величины. 7,8; 5,6 и 9,6 соответственно для кормленых и голодавших крыс и животных с аллоксановый диабетом. При аналогичной оценке для глутаматдегидрогеназной реакции получаются величины 7,3; 4,7 и 10,8. Таким образом, расчеты, проведенные для этих двух систем при различных физиологических состояниях, дают близкие значения отношений [НАД+]/[НАД-Н] в митохондриях.
б) Значение различий
окислительно-восстановительного баланса в митохондриях и цитоплазме
Измерение суммарных концентраций НАД+ или НАД-Н в цельной ткани печени (или в отдельных ее фракциях) не дает существенной информации о концентрациях пиридиннуклеотидов, доступных для различных дегидрогеназ. Хотя изящная работа Вильямса, Лунда и Кребса [34] дает возможность определять отношение концентраций [НАД+]/[НАД-Н] в двух важных фракциях клеток печени (митохондриях и цитоплазме), все же истинные концентрации НАД4- и НАД-Н в этих субклеточных образованиях . неизвестны. Между тем именно отсутствие этих сведений накладывает существенные ограничения, делая невозможным построение теории регуля-
Предыдущая << 1 .. 148 149 150 151 152 153 < 154 > 155 156 157 158 159 160 .. 167 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed