Цитологія, гістологія, ембріологія - Новак В.П.
Скачать (прямая ссылка):
*Цитологія, гістологія, ембріологія *
ком. Добре ущільнений целоїдин має хрящову консистенцію і є зовсім прозорим. В умовах значної вологості повітря, щоб запобігти помутнінню целоїдину, шматочки доцільно ущільнювати, використовуючи сірчану кислоту, яку ставлять у стаканчику під ковпак. Важливо, щоб затвердіння целоїдину проходило поступово і повільно, щоб він рівномірно ущільнювався по всій товщині шматочка, що є дуже важливим для отримання якісних зрізів.
Методика заливки у парафін
Техніка включення в парафін є такою. Фіксовані шматочки після зневоднення у спиртах (96 та 100°-ному або у двох 96°-них спиртах) переносять спочатку в суміш спирту (96°-ного чи абсолютного), розведеного наполовину хлороформом, на такий же час. В обох середовищах шматочки можна залишати на ніч. Крім хлороформу, часто користуються ксилолом. Після спирту об'єкти на 1—3 години переносять у спирт із ксилолом, а потім у чистий ксилол. З останнім працюють у двох порціях, витримуючи в кожній по 1—3 год, але не більше. Матеріал у ксилолі не слід перетримувати, оскільки він робить об'єкти крихкими і деформує тканини. Хлороформ має м'якшу дію, у ньому шматочки можна витримувати до 48 годин без шкідливого впливу. Використовуючи метод А. В. Русакова, у хлороформ (ксилол) добавляють кристалічну карболову кислоту з розрахунку 5 г на 100 мл хлороформу (ксилолу). Для поступового і кращого просочування шматочків із хлороформу, їх переносять у суміш хлороформу з парафіном і залишають у ній при температурі 35—40°С у термостаті на 2—3 години (можна залишити і на ніч). При роботі з ксилолом шматочки переносять у його суміш із парафіном на 2—3 години, але не більше. Суміш хлороформу з парафіном (і ксилолу з парафіном) готують з однакових частин, для чого парафін попередньо розплавляють.
Із суміші хлороформу з парафіном (чи ксилолу з парафіном) шматочки перекладають у попередньо приготовлений розплавлений парафін, який повинен зберігатись у термостаті, встановленому на 2—3°С вище точки плавлення парафіну (при-
13
*Цитологія, гістологія, ембріологія *
14
близно на 54—55°С). Просочування в парафіні проходить у двох порціях (чашечках), які нумерують.
Спочатку шматочки на 1,5—2,5 години поміщають у першу чашечку, а звідти перекладають теплим пінцетом у другу на 0,5—1,5 години. У цілому в обох порціях парафіну шматочки витримують від 2-х до 4-х годин. Після того, як шматочки пробули у 2-й чашці з парафіном достатній час, друга чашечка виймається з термостата. Шматочки теплим пінцетом швидко розкладають, а чашечку охолоджують в іншій (більшій) чашечці з холодною водою або в снігу. Щоб вода не потрапила у парафін, спочатку охолоджують дно чашечки, чекаючи коли з'явиться на поверхні парафіну плівка, потім обережно опускають чашечку одним краєм у воду і перевіряють, чи витримує плівка воду. Тільки після цього всю чашечку занурюють у воду і разом з великою чашкою ставлять під кран на 5—10 хв. Швидке охолодження парафіну робить його пластичним. Коли парафін затвердіє, його виймають із чашечки, для чого підрізають по краю і вирізають скальпелем блоки відповідно до розміру занурених у нього шматочків. Якщо парафін не відстає від чашечки, то її дно рекомендується підігріти чи просто вирізати блоки безпосередньо з чашечки. Охолоджений парафін легко виймається із формочки — для цього достатньо підрізати його тільки по краю. Формочками можуть бути і коробочки із щільного паперу.
Зручніше всього працювати з дрібними фарфоровими чашечками, які мають діаметр 5—6 см.
Різання целоїдинових блоків
Наклеєний на стабіліт чи дерев'яну колодочку целоїдино-вий блок виймають із 70°-ного спирту, де він постійно зберігається, і щільно закріплюють в об'єктотримачі мікротома. Дерев'яну колодочку затискують таким чином, щоб шматочок був розміщений перпендикулярно до мікротома. Ніж закріплюють у затискач і встановлюють під гострим кутом до лінії санок. У зв'язку з таким косим положенням ножа, ріжучою є більша частина леза, тому на ньому не можна допускати зазубрин. Після того, як ніж встановили, до нього обережно підводять об'єкто-
*Цитологія, гістологія, ембріологія *
тримач із закріпленим у ньому шматочком. Спочатку зрізують зайвий целоїдин, поки не оголиться тканина шматочка, а вже потім починають отримувати зрізи потрібної товщини.
Ніж і об'єкт під час різання за допомогою м'якої щіточки постійно змочують 70°-ним спиртом. Практично досить змастити спиртом тільки один ніж у той момент, коли з нього буде знято наступний зріз. У цьому випадку при зворотному русі ножа він обов'язково змаже і поверхню шматочка.
Змочування ножа під час зрізування зайвого целоїдину не є обов'язковим. Ніж вводять повільно, не тиснучи на нього. Неякісні зрізи забирають із ножа щіточкою. Коли виходять якісні зрізи, їх тут же, на ножі, акуратно розправляють щіточкою (тією, що змочували ніж) і цією ж щіточкою знімають зріз із ножа, переносячи його в чашечку (склянку) із 70°-ним спиртом.
Щоб запобігти згортанню зрізу, його край під час зрізування притримують щіточкою. Знімаючи зріз, потрібно намагатися трохи навертати його на щіточку, а не тягнути донизу через лезо ножа. Якщо це не вдається, зріз обережно опускають до ріжучого краю ножа і тут же обережно підкочують його пальцем. Опускаючи зріз у чашечку зі спиртом, натискують його щіточкою до дна, чим ще більше розправляють складки та зморшки, які залишилися.
