Биология развития млекопитающих - Манк М.
ISBN 5-03-001333-4
Скачать (прямая ссылка):
пропорцией ФГК-1А соответственно 50, 20, 5 и 1%. В этом случае нзозим
ФГК-1А, являющийся минорным компонентом, различим в виде довольно четкой
полосы, несмотря на то что представляет всего лишь 1 % общей активности.
Реципрокный гель, в котором активность ФГК-1Б составляет всего 1% общей
активности, должен дать такое же разрешение.
3.8. Определение точности количественного анализа изозима
1. Проанализируйте спектрофотометрически тканевые экстракты мышей,
несущих разные аллели ФГК.
Биохимический микроанализ ферментов ГФРТ и ФГК
213
2. Сделайте серию разведений, содержащих разные пропорции изозимных форм.
В примере, показанном на рис. 7.8, доля ФГК-1 А составляет 15, 30, 40 и
50%.
3. Проведите электрофорез, окрасьте гели (рис. 7.8, А) и измерьте
флуоресценцию сканированием в определенные интервалы времени (рис. 7.8,
Б).
4. Интегрируйте пики сканирования (рис. 7.8,В). Сопоставление вклада ФГК-
1 в эти смеси, оцененное данным методом, демонстрирует хорошее
соответствие результатам, полученным при спектрофотометрическом анализе
исходных образцов (см. подпись к рис. 7.8, В), и доказывает
целесообразность использования системы для анализа неизвестных образцов.
Благодарности
Я благодарна Хасу Катуриа и Мэри Харпер за сотрудничество в разработке и
использовании микроанализа ГФРТ/АФРТ, Теодоре Бючер, Ингрид Линке, Энди
Мак-Мэхон и Мэндри Фостен за участие в работе по анализу ФГК-1.
Литература
1. Monk М., Harper М. (1978). J. Embryol. Exp. Morphol., 46, 53.
2. Harper М. Monk М. (1983). J. Embryol. Exp. Morphol., 74, 15.
3. Epstein C. J. (1972). Science, 175, 1467.
4. Kratzer P. G" Gartler S. M. (1978). Nature, 274, 503.
5. Monk Af., Harper M. (1979). Nature, 281, 311.
6. Monk Af., McLaren A. (1981). J. Embryol. Exp. Morphol., 63, 75.
7. Hooper Af., Hardy K-, Handyside A., Hunter S., Monk Af. (1987).
Nature, 326, 292.
8. Monk Af., Handyside A., Hardy K., Whittingham D. (1987). Lancet, in
press.
9. Monk Af., Handyside A. (1987). J. Reprod. Fert., submitted.
10. Nielsen j. Т., Chapman V. Af. (1977). Genetics, 87, 319.
11. West J. D., Frels W. J., Chapman V. Af., Papaioannou V. E. (1977).
Cell, 12, 873.
12. Papaioannou V. E" West J. D., Bucher Т., Linke I. M. (1981). Dev.
Genet., 2, 305.
13. Harper Af. /., Fosten Af., Monk Af. (1981). J. Embryol. Exp.
Morphol., 67,
14. Johnston P. G. (1981). Genet. Res., 37, 317.
McMahon A., Fosten Af., Monk Af. (1981). J. Embryol. Exp.
Morphol., 64,
16' 207AakOn A" F°Sten M" Monk M' (1983)- J- Embryol. Exp.
Morphol., 74,
17. McMahon A., Monk Af. (1983). Genet. Res. Camb., 41 69
18. McMahon A. (1983). Genet. Res. Camb., 42, 77.
19. Ponder B. A. J., Schmidt G. H., Wilkinson Af. Af" Wood Af. /., Monk M
Reid A. (1985). Nature, 313, 689.
20. Ansell J. D., Micklem H. S. (1986). In: Handbook for Experimental
Immunology. Weis D. M. (ed.), Blackwell Scientific Publications, Oxford,
Chapter 56.
214
Глава 7
21. Woodruff М. F. A., Ansell J. D., Forbes G. M" Gurdon J. C" Burdoti D.
I., Micklem H. F. (1982). Nature, 229, 822.
22. Chapman V. М., Shows Т. B. (1976). Nature, 259, 665.
23. Kozak C" Nichols E" Ruddle F. H. (1975). Somat. Cell Genet., 1, 371.
24. Gartler S. М., Scott R. C., Goldstein J. L" Campbell B., Sparkes R.
(1971), Science 172 572
25. Epstein C. J. (1970). J. Biol. Chem., 245, 3289.
26. Bakay B., Telfer M. A., Nyhan W. L. (1969). Biochem. Med., 3, 230.
27. McBurney M. W" Adamson E. D. (1976). Cell, 9, 57.
28. Monk M" Kathuria H. (1977). Nature, 270, 599.
29. Harper М. I. (1981). Patterns of enzyme activity reflecting
genetic expres-
sion in mouse embryogenesis. PhD Thesis, University of London.
30. Beutler E. (1969). Biochem. Genet., 3, 189.
31. Meera Khan P. (1971). Arch. Biochem. Biophys., 145, 470.
32. Bucher Т., Bender W" Fundele R., Hofner H., Linke I. (1980). FEBS
Lett.,
115, 319.
33. McMahon A. (1981). Cell differentiation and X-chromosome activity in
the definitive germ-layers and the germ-line of the mouse. PhD Thesis,
University of London.
34. Festing M. F. W. (1987). International Index of Laboratory Animals.
5th edition, Laboratory Animals Ltd, Newbury, Berkshire, UK.
35. Harris H., Hopkinson D. A. (1976). Handbook of Enzyme Electrophoresis
in Human Genetics. Elsevier/North Holland, Amsterdam.
CJiaSa d
КАЧЕСТВЕННЫЙ АНАЛИЗ БЕЛКОВ НА РАННИХ СТАДИЯХ ЭМБРИОГЕНЕЗА МЫШИ
Сара Хаулет1 1. Введение
В результате оплодотворения яйцо, находящееся в относительном покое,
превращается в митотически делящуюся клетку, способную дать начало целому
организму. Логично ожидать, что процессы дробления, роста и
дифференцировки сопровождаются изменениями в синтезе специфических
белков. Паттерн транслируемых белков в клетках определяется характером
генной экспрессии, наличием мРНК, стабильностью белков и их модификацией
[1]. Каждый из указанных механизмов открывает широкий простор для
исследований. Решение этой задачи для раннего мышиного эмбриона
усложняется очень малыми количествами белка, тем не менее для этого
