Биология развития млекопитающих - Манк М.
ISBN 5-03-001333-4
Скачать (прямая ссылка):
может быть отмечен как "день 0", "день 1/2" и "день 1 беременности".
Время спаривания может быть изменено и приурочено к рабочему дню
затемнением вивария в дневное время и искусственным освещением его ночью.
Такое обращение цикла дает возможность иметь нужные стадии эмбрионального
развития в удобное время.
Если животные получены из лаборатории с иным циклом смены темноты и света
или предыдущий цикл неизвестен, им понадобится несколько дней адаптации к
новым условиям.
5.3. Ложная беременность и вазэктомия
Псевдобеременных животных получают так же, как описано в разд. 5.2, но в
результате спаривания с вазэктомирован-
Разведение мышей
21
ным самцом. Наиболее удобный для операции возраст самцов - около 6
недель, пока они не начали жиреть. Выбранные самцы должны относиться к
линии с хорошими репродуктивными способностями. Вазэктомия заключается в
вырезании короткого фрагмента семявыносящего протока. Операцию делают под
анестезией посредством единственного поперечного брюшного разреза.
Семявыносящий проток можно найти, не извлекая семенников, - для этого
достаточно оттянуть жировую подушку. Накладывать швы не обязательно. Края
разреза соединяют с помощью зажимов, которые нужно удалить через 12 дней.
Зашивать стенку тела нет необходимости.
В стерильности вазэктомированных самцов нужно убедиться посредством
контрольного спаривания.
5.4. Суперовуляция
В тех случаях, когда для работы требуется значительное количество
предимплантационных эмбрионов, овуляцию стимулируют гонадотропинами ГСЖК
(гонадотропин сыворотки жеребой кобылы) и чХГ (человеческий
хориогонический гонадотропин), вводя их самкам перед спариванием.
Успешная индукция суперовуляции зависит от ряда факторов - возраста,
веса, линии животных, времени инъекции гонадотропинов.
Наиболее подходящий возраст для суперовуляции 3-5 недель, причем оптимум
для данного генотипа находится в пределах 4-6 дней. У некоторых линий
лучший показатель возраста - вес, а если экспериментатор имеет дело с
коммерческими мышами, то вес служит единственным критерием возраста.
Сроки введения гонадотропинов взаимно связаны и зависят от светового
цикла вивария. Они оказывают влияние на число овулировавших яиц и
синхронность их развития. Оптимальный интервал между введением гормонов
составляет 40-46 ч. Овуляция обычно происходит через 10-13 ч после
инъекции чХГ. Для того чтобы добиться наилучшей синхронизации, нужно,
чтобы чХГ был введен до высвобождения эндогенного лютеини-зирующего
гормона (ЛГ). Считают, что эндогенный Л Г выделяется через 15-20 ч от
середины второго темного периода (полуночи), следующего за введением
ГСЖК. Таким образом, расписание инъекций для животных, содержащихся в
помещении со световым периодом от 8.00 до 20.00 ч, должно быть следующим:
ГСЖК вводят между 15.00 и 16.00, а чХГ спустя 46 ч - между 13.00 и 14.00,
т. е. за 3-4 ч до выделения эндогенного Л Г.
Обычная доза ГСЖК и чХГ составляет 2-5 ME, но разные линии и гибриды
могут реагировать на нее по-разному.
22
Глава 1
После инъекции самку подсаживают в клетку к безусловно плодовитому самцу
и на следующее утро проверяют наличие копулятивной пробки.
5.5. Анестетики
Несмотря на то, что мышей приходится анестезировать чаще, чем других
лабораторных животных, это процедура нередко для них кончается смертью.
Причиной гибели мышей может быть не только сверхвысокая доза анестетика,
но и гипотермия. Установлено также, что реакция на анестетики сильно
зависит от линии, возраста, пола, веса и упитанности мыши.
Наиболее часто в качестве анестетиков применяют пенто-барбитон,
трибромоэтанол (Avertin) и фентанилфлюанизон (Hypnorm, Grown Chemical Co.
Limited) с мидазоламом (Hyp-novel, Roche) [7, 8J.
Пентобарбитон можно приготовить разведением порошка в теплом нормальном
солевом растворе в концентрации 5 мг/мл или развести имеющийся в продаже
раствор (60 мг/мл) 1 : 10. Поскольку эффективная доза определяется
многими факторами, ее следует предварительно подобрать на контрольной
группе мышей той же линии, того же возраста, веса и пола. Для мыши весом
25 г необходимая доза составляет 0,7-1,0 мг.
Трибромоэтанол готовят следующим-образом.
1. Для получения 100%-ного маточного раствора смешайте 10 г
трибромоэтилового спирта с 10 мл третичного амилового спирта.
2. Чтобы приготовить рабочий раствор, маточный раствор следует развести
стерильной водой или физиологическим раствором до 2,5%.
3. Маточный и рабочие растворы храните в темноте при ¦ 4°С.
Свойства препарата и чувствительность к нему подопытных животных могут
значительно варьировать, поэтому и в случае трибромэтанола требуется
контрольная группа животных. Нужная доза для мыши весом 25 г составляет
около 3,0 мг. Есть данные, свидетельствующие о том, что трибромоэтанол
раздражает внутренние органы мыши, повреждает кишечник и может привести к
гибели; сила этого побочного эффекта зависит от линии мышей.
Фентанилфлуанизон в сочетании с мидазоламом обеспечивает наилучшую
