Биология развития млекопитающих - Манк М.
ISBN 5-03-001333-4
Скачать (прямая ссылка):
идентифицировать каждую хромосому и отметить на ней положение каждого
зерна серебра. Перед этим следует решить, нужно ли учитывать зерна,
прикасающиеся к концам хромосом. Удобно приготовить оценочные листы с
изображением каждой мышиной хромосомы, сегментированной G-методом (рис.
5.4) и прямо на них наносить положение зерен. По мере подсчета на
хромосомах будут выявляться "горячие точки". Таким образом должны быть
просчитаны 50-100 митотических клеток. Результаты могут быть выражены
общим числом зерен, лежащих на хромосомах во всех просчитанных
митотических клетках, и общим числом зерен, лежащих на каждой
индивидуальной хромосоме, отнесенным к ожидаемому числу зерен на этой
хромосоме при условии, что они распределены равномерно на единицу длины
хромосомы. Таблица процентной оценки длины гаплоидного набора
опубликована [23]. Например, если 265 зерен отмечены как лежащие на
хромосомах в 100 митотических клетках и если хромосома 1 представляет
7,20% генома, тогда приблизительно 19 зерен (7,20% от 265=19,08) следует
ожидать на гомологичной паре. Получив ожидаемое число для каждой
хромосомы и сравнив его с наблюдаемым, можно зарегистрировать любое
Рис. 5.7. А. Метафаза после репликационного окрашивания и гибридизации in
situ с зондом человеческого гена 2'-5,-oligoA-CHHTera3bi. На полосе А4
мышиной хромосомы 11 (обозначена стрелкой) обнаружено статистически
значимое число гранул. Б. Часть митотической клетки, иредокрашенной для
выявления G-сегментов и сфотографированной до гибридизации in situ с
зондом ГФРТ человека. Зерно (указано стрелкой) на фотографии, сделанной
после гибридизации in situ, локализует последовательность,
соответствующую полосе А6 на Х-хромосоме. В. Метафаза в клетках мыши,
гетерозиготной по неравной реципрокной транслокации Т (1; 17) 190Н,
расщепляющей хромосому 17 в сегменте В. В результате этой транслокации
образуются две маркерные хромосомы: длинная и короткая. После
гибридизации in situ с зондом Тср-1 большее число зерен можно обнаружить
над маркером меньшего размера (показан стрелкой), что свидетельствует о
проксимальном положении Тср-1
в сегменте 17В.
Кариотипирование гамет, эмбрионов и плодов
151
значительное отклонение. Если в какой-то хромосоме будет обнаружено
достоверное отличие от нормы, она может быть исследована более детально.
Если используются маркерные хромосомы, анализ может быть упрощен, так как
ожидаемые по отношению к наблюдаемым значениям числа зерен нужно отнести
только к общей процентной длине маркеров в геноме. Следует заметить,
однако, что, если маркеры используются в гетерозиготном состоянии,
ожидаемое число зерен уменьшится вдвое (можно полагать, что другая их
половина лежит на немаркированных и поэтому не учтенных нормальных
гомологах).
Благодарности
В этой главе сделана попытка изложить существующие методы получения и
использования препаратов хромосом эмбрионов разных стадий развития.
Некоторых авторов этих новых методик мы упомянули в библиографических
ссылках. Особую благодарность я приношу доктору Веронике Бакл и Майку
Бер-теншоу за их помощь в разработке метода гибридизации in situ.
Литература
1. Kaufman М. Н. (1982). J. Embriol. Exp. Morphol., 71, 139.
2. Robertsoon E. J., Kaufman М. H., Bradley A., Evans M. J. (1983). In:
Tera-tocarcinoma Stem Cells. Cold Spring Harbor Conference on Cell
Proliferation. Silver L. М., Martin G. R., Strickland S. (eds), Cold
Spring Harbor Laboratory Press, New York, Vol. 10, p. 647.
3. Donahue R. P. (1982). Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 69, 74.
4. Maudlin /., Fraser L. R. (1977). J. Reprod. Fertil., 50, 275.
5. Tarkowski A. К¦ (1966). Cytogenetics, 5, 394.
6. Baranov V. S. (1983). Genetica, 61, 165.
7. Dyban A. P., Baranov V. S. (1978). "Nauka". Moscow, Russia.
8. Gropp A. (1982). Vichows Arch. (Pathol. Anat.), 395, 117.
9. Winking H. (1978). Mouse News Lett., 58, 53.
10. Burgoyne P. S. (1987). In: International Index of Laboratory Animals.
5th Edition, Festing M. F. W. (ed.), Laboratory Animals Ltd, PO Box 101,
Newbury, Berkshire, UK.
11. Davisson М. T. (1981). In: Genetic Variants and Strains of the
Laboratory Mouse. Green М. C. (ed.), Gustav Fischer Verlag, Stuttgart and
New York, p. 357.
12. McLaren A. (1975). J. Embryol. Exp. Morphol., 33, 205.
13. Nesbitt M. N., Francke U. (1973). Chromosoma, 41, 145.
14. Sawyer J. R., Hozier J. C. (1986). Science, 232, 1632.
15. Rules for Nomenclature of Chromosome Anomalies. (1981). In: Genetic
Variants and Strains of the Laboratory Mouse. Green М. C. (ed.), Gustav
Fischer Verlag, Stuttgart and New York, p. 314.
16. Evans E. P., Burtenshaw M. D., Adler I.-D. (1985). Genet. Res. Camb.,
46, 353.
17. Searle A. G. (1981). In: Genetic Variants and Strains of
the Laboratory
Mouse. Green М. C. (ed.), Gustav Fischer Verlag, Stuttgart and
New York,
p. 324.
152
Глава 5
18. Kanda N. (1973). Exp. Cell Res., 80, 463.
19. Monk М., McLaren A. (1981). J. Embriol. Exp. Morphol., 63, 75.
