Биология развития млекопитающих - Манк М.
ISBN 5-03-001333-4
Скачать (прямая ссылка):
ушей и прищипывание пальцев. Комбинируя их, можно получить до 9999 меток
(рис. 1.2). Важно помнить, что ухо может
2-171
18
Глава 1
Рис. 1.2. Системы нумерации, принятые для идентификации мышей.
быть случайно оборвано или откушено, поэтому мечение животных каждой
клетки следует протоколировать.
Для инъекции лучше всего пользоваться иглами 25 или 27 калибра (0,5 или
0,4 мм). Необходимо следить, чтобы пузырьки воздуха не попадали в иглу
или шприц. При внутрибрю-шинных инъекциях мышей держат так, как показано
на рис. 1.1,5: спиной вниз и слегка оттянув им вниз голову. Место укола -
2-3 мм в сторону от пупка.
Подкожную инъекцию можно сделать в задней области шеи, рядом с большим
пальцем, удерживающим мышь.
Мышь легко забить смещением шейных позвонков.
1. Возьмите мышь за основание хвоста, как описано в разд. 3.1.
2. Вместо того чтобы захватить мышь за кожу шеи, крепко защипните шею и
одновременно потяните за основание хвоста. Или, оттягивая хвост, прижмите
шею металлическим стержнем или линейкой.
Если нужно забить много мышей, пользуются специальной камерой-
контейнером, соединенной с цилиндром, наполненным
3.3. Инъекции
3.4. Умерщвление
Разведение мышей
19
двуокисью углерода. Животных помещают в контейнер и заменяют воздух
двуокисью углерода. Следует заметить, что взрослые мыши погибают быстрее,
чем молодняк в возрасте 1-8 суток (см. также разд. 8).
4. Разведение
Мыши начинают размножаться в возрасте 6-8 недель; длительность
репродуктивного периода у разных линий варьирует и составляет
приблизительно 200 дней. Беременность длится 20 дней, роды часто
сопровождаются послеродовым эструсом. Лактация, совпадающая с
беременностью, может затормозить имплантацию (т. е. эмбрионы остаются
жизнеспособными, но блокируются на стадии бластоцисты). Размножающихся
мышей обычно содержат парами или по три (один самец и две самки) или в
виде гаремов (один самец и больше двух самок). Не рекомендуется сажать в
клетку более одного самца - это приводит к дракам. Оптимальна одна пара
на клетку. Другие пропорции самцов и самок дают больший приплод на
клетку, но при этом увеличивается смертность молодняка. Мыши перестают
питаться материнским молоком примерно в трехнедельном возрасте и должны
быть удалены из клетки перед новыми родами. Чтобы предотвратить драки
между молодыми самцами, по прекращении вскармливания молоком их держат в
одной клетке. Взрослых самцов из разных клеток не смешивают.
Размножение следует протоколировать и непродуктивных самцов и самок,
приносящих потомство реже чем через 40дней, выбраковывать.
Выбор методики разведения зависит от требуемого количества животных и от
их принадлежности к инбредной или аут-бредной линии. Линия инбредных
мышей должна поддерживаться спариванием сибсов (братХсестра), в то время
как при размножении мышей аутбредной линии инбридинг следует свести к
минимуму [1, 4].
Диких мышей можно разводить в обычных клетках, но при этом нельзя не
забывать об их способности прыгать.
5. Эксперименты
5.1. Самцы-производители
Для оценки самцов-производителей ставят контрольное спаривание, кроме
того, регистрируют все последующие спаривания, отмечая не только сам факт
спаривания, но и, его результаты.
2*
50
Глава 1
X
5.2. Получение мышей с известным сроком беременности /
Эстральный цикл мышей обычно длится 4 дня, самки способны к
оплодотворению только на стадии течки (эструса).
Если оплодотворенные самки требуются ежедневно, достаточно иметь в
распоряжении серию клеток с самцом и тремя самками в каждой, исходя из
предположения, что одна самка из четырех в данный день окажется в
эструсе. Соотношение один самец к трем самкам на клетку обычно дает
наилучшие результаты для большинства линий.
Число оплодотворенных самок к определенному дню можно увеличить,
воспользовавшись эффектом Уиттена [5]. Если группу самок поместить с
самцом, их эстральный цикл синхронизируется, и большинство животных будут
оплодотворены на третью ночь. Для этого самец и самки содержатся в одной
клетке, разделенной перегородкой, в течение двух дней, а на третий день
им дают возможность спариваться [6J. Существует и другая возможность
иметь одновременно много оплодотворенных самок. Для этого необходимо
отобрать для спаривания самок, находящихся в состоянии эструса. У таких
животных влагалище раскрыто, ткань его розовая, увлажненная, заметно
исчерченная.
Факт спаривания у мышей констатируют по наличию во влагалище слизистого
сгустка, образующегося в результате коагуляции эякулята, т. е.
вагинальной, или копулятивной, пробки. Обычно пробка хорошо видна, но
иногда для ее обнаружения пользуются зондом. Пробка может сохраняться во
влагалище до 18 часов, однако чем скорее проверить животное, тем меньше
вероятности ее потери. Спаривание мышей обычно происходит в середине
темного времени суток. Время спаривания и возраст эмбрионов в разных
лабораториях определяют по-разному: день обнаружения вагинальной пробки
