Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Манк М. -> "Биология развития млекопитающих " -> 38

Биология развития млекопитающих - Манк М.

Манк М. Биология развития млекопитающих — М.: Мир, 1990. — 406 c.
ISBN 5-03-001333-4
Скачать (прямая ссылка): biologiyarazvitiyamlekopitaushih1990.djvu
Предыдущая << 1 .. 32 33 34 35 36 37 < 38 > 39 40 41 42 43 44 .. 162 >> Следующая

правильный чистый разлом капилляра перпендикулярно его длинной оси (рис.
3.11, А, 3).
5. Оплавьте конец пнпетки, вновь нагрев иить и приближая ее концом к
пипетке до тех пор, пока поверхность разлома последней не начнет
утолщаться (рис. 3.11,А,4). Выключите нагрев.
Вполне удовлетворительные инструменты можно приготовить, разбивая кончик
капилляра о холодную нить. Если пипетку неоднократно упирать в холодный
стеклянный шарик, получается разлом примерно на уровне нужного
внутреннего диаметра. Обычно эти разломы проходят не перпендикулярно, а
под углом, но, поскольку конец пипетки оплавляется, незначительные
неровности линии разлома не имеют особого значения.
Прямые держатели и пипетки для инъекций in vivo подходят для манипуляций,
осуществляемых в манипуляционной камере. Для манипуляций с 9-дневными
эмбрионами или старше необходимо дважды изогнуть пипетки над
микрогорелкой. Эти изгибы подобны тем, что описаны для сплошных игл
(табл.
Эксперименты с постимплантацноннымн эмбрионами мыши___________95-
Таблица 3.14. Приготовление инъекционных пипеток для работы
Способ 1
1. Вытнните полую иглу из тонкостенного капилляра на электродном вытя-
гивателе.
2. Закрепите иглу в инструментальном держателе, присоединенном при помощи
трубки к источнику сжатого воздуха нли к наполненному воздухом шприцу на
20 мл.
3. Поместите инструмент горизонтально на мнкрокузницу. Переломите пипетку
в месте внутреннего диаметра 15 мкм (рис. 3.11,5,/).
4. Продувая воздух через пипетку, прикоснитесь нагретой нитью к ее
верхушке так, чтобы стекло с ней сплавилось, но сразу же за местом
сплавления осталось небольшое отверстие для продуваемого воздуха (рис.
3.11, Б, 2).
5. Не прекращая подачи воздуха, быстро отодвиньте ннть от верхушки
пипетки, в результате этого образуется прямой, сплошной точечный конец
(рис. 3.11,5,3). Если точечная нерхушка слишком велика илн изогнута,
отломите конец н повторите сначала (от сплавления нити со стеклом).
6. Ориентируйте инструмент вертикально, так, чтобы его отверстие было
направлено к нити. Поднесите нагретую нить к отверстию, чтобы оплавить,
его края (рис. 3.11,5,4).
Способ 2
1. Разломите полую иглу в месте нужного диаметра (т. е. 50 мкм).
2. Сплавьте нагретую нить с концом пипетки, затем быстро отодвиньте ее,,
чтобы получить сплошную заостренную верхушку (рис. 3.11, В, 1, 2).
3. Ориентируйте инструмент вертикально. Сфокусируйте струю воздуха
микрокузницы сразу за сплошной верхушкой (это поможет локализовать
нагревательный эффект нити). Продувайте воздух через инструмент,
удерживая нагретую ннть у места будущего отверстия пипетки, но не
прикасаясь ею к стеклу. Повышайте температуру ннтн до тех пор, пока не-
появится маленький пузырек расплавленного стекла (рис. 3.11, В, 3). Когда
пузырек прикоснется к нити, быстро выключите нагревание (рис. 3.11,5,4).
Пузырек лопнет, и на его месте останется сравнительно большое выступающее
отверстие (рис. 3,11,6,5).
4. Сплавьте нить с краями апертуры, которая будет уменьшаться в размере
(рис. 3.11,6,5).
5. Когда апертура уменьшится достаточно, выключите нить и сдвиньте ее
вертикально вниз. Выступающее стекло отломится (рис. 3.11,6, 7).
6. Оплавьте края апертуры (рис. 3.11,5,5).
3.13), хотя точный угол изгибов будет зависеть от того, как установлен
микроманипулятор (рис. 3.10). Как было замечено-ранее, важно, чтобы концы
удерживающей и инъекционной пипеток были наклонены вниз под очень малым
углом (рис. 4.11, Г, 2), иначе плечо вытянутой части пипетки будет мешать
ее контакту с эмбрионом или донорской тканью.
Пипетка для инъекций in vivo должна отвечать двум основ-1 ным
требованиям. Первое - инструмент должен проникать в ткань легко, второе -
отверстие пипетки во время ее движения в ткани не должно закупориваться
прилипающими клетками..
96
Глава 3
Рис. 3.11. Изготовление микрохирургических стеклянных инструментов (по де
Фонбрюну [33]). Описание процедуры дано в табл. 3.13 и 3.14.
А. Удерживающая и инъекционная пипетки для операций in vitro. В.
Инъекционная пипетка для операций in vivo (способ 1). В. Инъекционная
пипетка для операций in vivo (способ 2). Г. Изгибы на концах инструментов
1-конец сплошной иглы; 2 - конец инъекционной или удерживающей пипетки
для
работы в чашке Петри.
В связи с этим де Фонбрюн рекомендует пользоваться пипетками со сплошным
заостренным концом, при этом отверстие пипетки должно располагаться
сбоку, сразу за верхушкой (рис. 3.11, Б, В). В табл. 3.14 описаны два
способа их изготовления. Способ 1 подходит для пипеток с маленьким
диаметром, в то время как способ 2 - для пипеток большего диаметра. Ес-
Эксперименты с постимплантациониыми эмбрионами мыши
97
ли между операциями возникает необходимость заменить инъекционную
пипетку, можно ввести растворы при помощи обычной инъекционной пипетки
для работы in vitro.
10. Заключение
Анализ обособления первичных тканей в ходе гаструляции и раннего
эмбриогенеза представляет собой трудную задачу. Однако в последнее время
Предыдущая << 1 .. 32 33 34 35 36 37 < 38 > 39 40 41 42 43 44 .. 162 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed