Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Манк М. -> "Биология развития млекопитающих " -> 137

Биология развития млекопитающих - Манк М.

Манк М. Биология развития млекопитающих — М.: Мир, 1990. — 406 c.
ISBN 5-03-001333-4
Скачать (прямая ссылка): biologiyarazvitiyamlekopitaushih1990.djvu
Предыдущая << 1 .. 131 132 133 134 135 136 < 137 > 138 139 140 141 142 143 .. 162 >> Следующая

эмбрионов в яйцевод или матку
1. Анестезируйте мышь (разд. 6.4.4).
2. Положите мышь спиной вверх (головой "на 12 часов"), смочите спину 70%-
ным этанолом и разделите шерсть по средней линии.
3. Тонкими заостренными ножницами (10,5 см) сделайте разрез длиной 2 см
вдоль средней линии.
4. Тонким зубчатым пинцетом (10,5 см) сдвиньте кожу влево и через стенку
тела найдите яичник в области поясничной впадины. Над этим районом
ножницами разрежьте брюшные мышцы.
5. Извлеките яичник, яйцевод и часть рога матки, отведите в направлении
головы мыши и поместите на небольшой марлевый тампон.
6. Продолжайте, как описано в разд. 6.4.5 (перенос в яйцевод) или 6.5.6
(перенос в матку).
6.4.5. Перенос эмбрионов в яйцевод
Эмбрионы всех предимплантационных стадий (от яйца на стадии пронуклеуса
до поздней бластоцисты) могут быть перенесены в ампулы реципиента в 1-й
день псевдобеременности (день обнаружения копулятивной пробки).
Подготовьте реципиентов в соответствии с указаниями табл. 13.10 и
продолжайте процедуру дальше.
1. С помощью препаровального микроскопа (рекомендуется Wild М5)
исследуйте капсулу яичника и найдите бахромчатый конец яйцевода (обычно
он свободно лежит под яичником и направлен к средней линии).
2. Пользуясь парой глазных пинцетов, вскройте капсулу яичника в месте
наименьшей васкуляризации и поместите мышь в положение, облегчающее
доступ к воронке яйцевода (головой "на 10 часов" для оператора-правши).
3. Под контролем другого микроскопа в пастеровскую пипетку с тонко
оттянутым концом введите несколько "маркерных" пузырьков воздуха, а затем
и эмбрионы в небольшом объеме среды М2 (табл. 13.2).
4. С помощью тонкого пинцета (в левой руке) отведите яйцевод так, чтобы
обнажился его бахромчатый конец, и введите в него кончик пипетки;
возвратите пинцетом яйцевод на место. Выпустите яйца и пузырьки воздуха
(пузырьки воздуха должны быть видны через стенку яйцевода), осторожно
извлеките пипетку и с помощью пинцета на несколько секунд сомкните
отверстие яйцевода.
5. Возвратите яичник и яйцевод в брюшную полость.
6. Сдвиньте кожу вправо, обнажите яйцевод, поверните мышь (головой "на 5
часов") и повторите процедуру.
7. После возвращения правого яичника и рога матки в брюшную полость
соедините кожу одним или двумя за-
Низкотемпературная консервация яиц и эмбрионов мыши
353
Таблица 13.11. Синхронный и асинхронный перенос эмбрионов в матку
Тип переноса Стадия развития эмбриона Стадия псевдобеременности
реципиента1)
Синхронный 8-клеточная День 3-й
Асинхронный Морула/ранняя бластоциста День 4-й
Морула/ранняя бластоциста День 3-й
Поздняя бластоциста/вылупившаяся бластоциста День 3-й или 4-й
') День 1-й - день обнаружения копулятивной пробки.
жимами Michel. Накладывать швы на брюшные мышцы нет необходимости.
6.4.6. Перенос эмбрионов в мвтиу
Эмбрионы на стадиях 8 бластомеров, морулы и бластоцисты можно переносить
в рога матки реципиента 3-го или 4-го дня псевдобеременности (день 1-й -
день обнаружения копулятивной пробки). Эмбрионы ранних
предимплантационных стадий вскоре после переноса в матку дегенерируют. В
случае свежесобранных эмбрионов синхронный и асинхронный перенос
оказывается успешным, если эмбрионы находятся на более продвинутых
стадиях развития по сравнению с функциональным состоянием эндометрия
(табл. 13.11). Эмбрионы менее продвинутых стадий по сравнению с маткой
(например, 8-клеточные эмбрионы, трансплантируемые в матку 4-го дня
беременности) имплантируются редко. Если эмбрионы подвергались
манипуляциям in vitro, т. е. замораживанию или культивированию (и
развитие их в связи с этим замедлилось), асинхронный перенос, дающий
возможность адаптации перед имплантацией, повысит их выживаемость (табл.
13.11).
После подготовки мыши-реципиента, описанной в табл. 13.10, продолжайте
следующим образом.
1. С помощью препаровального микроскопа небольшого увеличения и с длинным
рабочим расстоянием (например, Prior Stereomaster 240; BDH)
проконтролируйте наличие в яичнике активных (красных) желтых тел.
2. Под другим микроскопом в тонко оттянутую пастеровскую пипетку введите
несколько маркерных пузырьков воздуха, затем захватите эмбрионы.
3. Держите пипетку и иглу (инъекционную иглу 25 калибра или швейную иглу
№ 7) правой рукой; тонким тупым пинцетом, наложив его на яйцевод,
придерживайте матку (не сдавливайте рог матки).
354
Глава 13
Таблица 13.12. Выживаемость ооцитов и эмбрионов мыши после
криоконсервации путем замораживания и витрификации
Способ кризкон-сервации Стадия развития Линия Выживае- мость1)
Литература
Замораживание
1,5 М ДМСО Ооциты Гибрид Fi2) 1бз> [21]
Медленное охлаж- 8-клеточная Гнбрнд Fi4) 42 [13]
дение до -70°С
Медленное нагре- Случайное скре- 50 [13]
вание щивание
Гнбрнд F25) 20-30 [35]
Инбредная 21 [36]
СВА/СаН
ХО 14 [36]
1.5 М ДМСО 8-клеточная Гнбрнд Fi4) 36 [13]
Медленное охлаж- Случайное скре- 51
дение до -40 °С щивание FM1 54 [23]
Быстрое нагрева- Гибрид F25) 35 [27]
Предыдущая << 1 .. 131 132 133 134 135 136 < 137 > 138 139 140 141 142 143 .. 162 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed