Биология развития млекопитающих - Манк М.
ISBN 5-03-001333-4
Скачать (прямая ссылка):
препарате останутся вирулентными, а это имело бы катастрофические
последствия для колонии мышей. Мы обнаружили, что вирус Сендай в качестве
фузогена эффективен для кариопластов яиц и очень ранних эмбрионов. При
попытках слить клетки эмбрионов более продвинутых стадий развития или
тканей взрослых животных степень слияния падает до 0-10%. Далее, если
вирус Сендай ¦был применен для слияния кариопласта с яйцом, бластомеры,
¦образовавшиеся из такого реконструированного яйца, уже не могут
впоследствии служить донорами ядер, так как повторное применение вируса
не будет эффективным. Можно полагать, что причиной этого феномена
является потеря рецепторов клеточной поверхности, способных связывать
вирус. Во всяком случае, это обстоятельство исключает возможность
серийных ядер-ных трансплантаций, осуществляемых только с помощью вируса
Сендай. Кроме того, свойства вируса, как и ПЭГ, варьируют в зависимости
от партии.
Наиболее перспективным нам представляется метод слияния ¦клеток,
включающий использование электрического тока [23].
Трансплантация ядер в яйца
321
Этот метод в высшей степени эффективен. Его основное преимущество
заключается в возможности менять условия в зависимости от типа клетки и
осуществлять серийные ядерные трансплантации. В соответствии с этой
методикой клетки сначала получают импульс переменного тока, вызывающий
образование тесных контактов и соединение, или "агглютинацию". Вслед за
этим следует импульс постоянного тока, приводящий к разрушению клеточных
мембран в месте контакта и в конечном счете к слиянию клеток. При этом
силу тока, длительность воздействия, число импульсов, а также среду, в
которой осуществляется слияние и затем культивируются клетки, температуру
и предварительную обработку клеток можно варьировать, создавая
оптимальные условия для слияния клеток данного типа. С помощью этого
метода уже достигнуты определенные успехи [24, 25], следовательно, можно
считать, что некоторые из параметров слияния уже установлены. Однако при
значительных различиях в размере клеток, как, например, в случае крупного
яйца, сливающегося с маленьким кариопластом в описанных выше
экспериментах с ядерными трансплантациями, возникает проблема точного
соединения клеток. Эта проблема не решена. Кроме того, значительная
разница в стадии развития и типе сливаемых клеток создает .необходимость
подбора специальных условий для слияния. Можно предположить, что, если
физические параметры для данной системы будут установлены, слияние клеток
с помощью электрического тока даст надежные результаты и поможет избежать
осложнений, связанных с использованием вирусных и химических фузогенов.
Благодарности
Мы благодарны Саре Хаулет за полезное для нас обсуждение, Катарине Струд
за рисунки и диаграммы, а Полю Майлсу и Джеффу Лисону за изготовление
оттягивателя игл и прибора для затачивания.
Литература
1. McGrath Solter D. (1983). Science, 220, 1300.
2. Whittingham D. G. (1971). J. Reprod Fert. (Suppl.), 14, 7.
3. Whittingham D. G" Wales R. G. (1969) Aust. J. Biol. Sci., 22, 1065.
4. Harris H., Watkins J. F. (1965). Nature, 205, 640.
5. Giles R. E., Ruddle R. H. (1973). In Vitro, 9, 103.
6. Neff J. М., Enders J. F. (1968). Proc. Soc. Exp. Biol. Med., 127,
260.
7. Gardner R. L. (1978). In: Methods in Mammalian Reproduction.
Daniel J. C.
(ed.), Academic Press, New York, p 137.
8. Chapman V. М., Whitten W. K-, Ruddle F. H. (1971). Dev. Biol.,
26, 153.
9. Kaufman М. H. (1978). In: Methods in Mammalian Reproduction. Daniel
J. C.
(ed.). Academic Press, New York, p. 21.
21-171
322
Глава 12
10. Kaufman М. Н. (1983). Early Mammalian Development: Parthenogenetic
Studies. Cambridge University Press, Cambridge.
11. Cuthbertson K. S. R. (1983). J. Exp. Zool., 226, 311.
12. Kaufman М. H. (1982). J. Embryol. Exp. Morphol., 71, 139.
13. McGrath J., Solter D. (1984). Science, 226, 1317.
14. Surani М. A. H., Barton S. C" Norris M. L. (1986). Cell, 45, 127.
15. Barton S. C" Surani М. A. H. (1983). Exp. Cell Res., 146,
187.
16. Barton S. C., Adams C. A., Norris M. L" Surani М. A. H.
(1985). J. Embryol.
Exp. Morphol., 90, 267.
17. Surani М. A. H., Barton S. C. (1983). Science, 222, 1034.
18. Surani М. A. H., Barton S. C., Norris M. L. (1984). Nature,
308, 548.
19. Mann J. R., Lovell-Badge R. H. (1984). Nature, 310, 66.
20. Barton S. C., Surani М. A. H., Norris M. L. (1984), Nature, 311,
374.
21. Eglitis M. A. (1980). J. Exp. Zool., 213, 309.
22. Spindle A. (1981). Exp. Cell Res., 131, 465.
23. Zimmermann V., Vienken J. (1982). J. Membr. Biol., 67, 165.
24. Kubiak J. Z" Tarkowski A. K. (1985). Exp. Cell Res., 157, 561.
25. Willadsen S. M. (1986). Nature, 320, 63.
ГЛАВА 13
НИЗКОТЕМПЕРАТУРНАЯ КОНСЕРВАЦИЯ ЯИЦ И ЭМБРИОНОВ МЫШИ
Маури Вуд, Дэвид Уиттингхэм,
Уильям Ролл1
1. Введение
Методы хранения ооцитов и эмбрионов в жидком азоте (ЖА) чрезвычайно важны
для развития животноводства, биологии и медицины. Исследователь,
работающий в области биологии развития млекопитающих, должен иметь в
