Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Манк М. -> "Биология развития млекопитающих " -> 12

Биология развития млекопитающих - Манк М.

Манк М. Биология развития млекопитающих — М.: Мир, 1990. — 406 c.
ISBN 5-03-001333-4
Скачать (прямая ссылка): biologiyarazvitiyamlekopitaushih1990.djvu
Предыдущая << 1 .. 6 7 8 9 10 11 < 12 > 13 14 15 16 17 18 .. 162 >> Следующая

Растворение пронуклеарных мембран Цитокинез 2-11 1-2 4-7 5-8 8-10 11-17
17-20 16,5-19,5 18,5-21,5 ~12 ~32
Второй клеточный цикл [И] (2-клеточиая стадия) Период G[ 1-я
транскрипция эмбриональных генов Период S 2-я транскрипция
эмбриональных генов Период G2 Период М Цитокинез Часы после деления
Часы после инъекции чХГ
0-и 1-1,5 1-6 7-10 6-18 18-20 18-20 ~48-50
Третий клеточный цикл [3] (4-клеточная стадия) Период G[ Период S Период
G2+M 0-1 1-8 8-13 ~58-60
Четвертый клеточный цикл [3, 12, 13] (8-клеточная стадия) Период G,
Период S поляризация цитоплазмы уплощение клеток (компактизация)
поляризация поверхности Период G2/M Цитокинез (декомпактизация в ходе
митоза у иитактиых эмбрионов) 0-2 2-9 2-7 3,5-7,5 5-9,5 9-12 11-14
~72
Эксперименты с преднмплантационными эмбрионами мыши
33
Продолжение табл. 2.1.
Временная характеристика развития
Часы после осеменения Часы после инъекции чХГ
Пятый клеточный цикл [13-15] (16-клеточная стадия) Рекомпактнзация после
деления (интактные эмбрионы) Цитокинез (наружные клетки) (внутренние
клетки) 0,5 11 - 12 13-14 -84
Шестой клеточный цикл [13, 14] (32-клеточная стадия) Начало кавитации
(интактные эмбрионы) 0,2 -90-98
Последующие клеточные циклы Полностью сформированная бласто- цнета
Вылупившаяся бластоциста -110 -120
1) В этой таблице приводится перечень четко наблюдаемых морфологических
собы-тин, имеющих место в преднмплантацнонный период развития мыши in
vitro. Указана их связь с клеточными циклами (если она известна), а также
время, отделяющее эти события от предшествующего деления дробления н
ннъекцнн чХГ.
2.2. Стадии дробления (от 2 до 8-клеточной)
Развитие от 2-клеточной стадии до поздней 8-клеточной - ранней 16-
клеточной стадии (морулы) (рис. 2.1) происходит в яйцеводе примерно за 47
ч. Второй клеточный цикл, как и первый, относительно продолжителен (около
20 ч), в то же время третий и последующие циклы приближаются по своей
длительности к 12-часовому циклу соматической клетки. Таким образом,
популяции на нужной стадии должны извлекаться из яйцеводов через
определенное время после инъекции чХГ или оплодотворения in vivo. Однако
эта точность весьма относительна, если учитывать межзародышевые и
внутризародыше-ные вариации темпов развития, выражающиеся в морфологи-'
ясских особенностях стадий или в стадиях клеточного цикла.
Возрастная гетерогенность эмбрионов объясняется асинхрон-постью
оплодотворения [8], а вариации стадий клеточного Цикла, по-видимому,
связаны с внутренними, генетическими различиями между бластомерами [16].
Чтобы понять механизмы развитии, нужно иметь точные представления о
после-
3-171
34
Глава 2
довательности событий н их временных характеристиках. Во г почему так
необходимо совершенствовать методы получения синхронизированных эмбрионов
и составляющих их клеток. Эти методы обсуждаются в разд. 3.1 и 3.2.
Наиболее чистый способ извлечения эмбрионов из яйцевода заключается в
вымывании их при помощи шприца с тонкой иглой. Он требует определенного
навыка, но овладевший этим способом всегда предпочтет его более
традиционному - разрушать яйцевод тонким часовым пинцетом и затем
выбирать зародыши среди клеточных скоплений.
Процедура извлечения эмбрионов из яйцевода заключается в следующем.
1. Извлеките яйцевод. Для этого вначале перережьте верхушку матки так,
чтобы небольшая часть ее осталась с яйцеводом, затем отсеките яйцевод от
яичника. Это нужно сделать очень тщательно, чтобы не повредить отверстие
яйцевода, иначе потом будет очень трудно ввести иглу. Для промывания
яйцевода наиболее пригодны металлические иглы 30-го калибра, отрезанные и
отполированные так, чтобы конец был прямой и гладкий.
2. Поместите вырезанный яйцевод в каплю (она должна покрывать яйцевод) М2
+ БСА (табл. 2.5) в пластиковой чашке Петри на нагревательном столике
бинокулярного микроскопа. Если капля слишком велика, яйцевод будет
плавать, затрудняя дальнейшие манипуляции.
3. Воспользуйтесь глазным пинцетом, чтобы удержать яйге-вод и найти его
конец (имеющий у мышей многих штаммов вид ребристого рукава). Затем
введите в него иглу, соединенную со шприцем объемом 1 мл, наполненным
средой для вымывания: М2 + БСА.
4. Инъецируйте 0,1-0,2 мл среды. В случае удачи яйцевод раздуется и среда
вместе с эмбрионами выльется из перерезанного конца матки.
5. Отберите эмбрионы из клеточной массы при помощи пипетки, отмойте их,
перенеся через каплю теплой М16+БСА (табл. 2.5), и культивируйте в той же
среде под парафиновым маслом при 37°С (в воздухе должно быть 5% примеси
СОг).
2.2.1. Двуклеточный блок
Здесь необходимо сделать одно важное замечание. Яйца и эмбрионы
большинства мышиных линий, помещенные в культуральную среду до середины
2-клеточной стадии, останавливаются в развитии на стадии G2 второго
клеточного цикла,- явление, названное двуклеточным блоком [16]. Если
эмбрионы
Эксперименты с предимплантационными эмбрионами мыши___________35
Таблица 2.2. Линии мышей, не подвержевиые "двуклеточному блоку"1*
Предыдущая << 1 .. 6 7 8 9 10 11 < 12 > 13 14 15 16 17 18 .. 162 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed