Кроветворная и лимфоидная ткань - Лурия Е.А.
Скачать (прямая ссылка):
Для воспроизведения эффекта не обязательно проводить совместную инкубацию лимфоцитов, обработанных антигеном, и клеток-мишеней. Надосадочная жидкость, полученная при центрифугировании среды, на которой культивировались лимфоциты от туберкулинчувствительного донора в присутствии туберкулина в течение 17 часов и более, обладает, как оказалось, цитотоксической активностью.
Интересно отметить, что эффект лизиса не связан с генетическими различиями между лимфоцитами и мишенями. При использовании в качестве мишеней фибробластов эм-
брионов инбредных крыс и лимфоцитов таких же доноров за 72 часа происходит лизис фибробластов, если в среде присутствует антиген, к которому сенсибилизированы лимфоциты.
Описанный феномен воспроизведен при использовании сенсибилизированных лимфоцитов мышей, крыс, морских свинок и человека (Granger a. oth., 1969). Во всех случаях лимфоциты при инкубации с соответствующим антигеном выделяли в среду вещества, приводящие к разрушению клеток-мишеней.
Культуральная среда, содержащая цитотоксические вещества, оказывает в то же время стимулирующее воздействие на лимфоциты, вызывая их пролиферацию (Wolstenc-roft, Dumonde, 1970). При ее добавлении к суспензиям син-генных или аллогенных лимфоцитов, как от иммунных, так и от неиммунных доноров, наблюдается интенсивное включение Н3-тимидина, свидетельствующее о повышении митотической активности клеток. Таким образом, иммунные лимфоциты в присутствии антигена выделяют фактор, который является митогенным для лимфоцитов, что, по мнению Wolstencroft и Dumonde, может иметь важное значение для регуляции иммунного ответа в организме.
Выделение цитотоксических веществ, отделимых от клеток, может происходить не только при культивировании лимфоцитов от доноров с реакцией ЗПЧ в присутствии антигена, но и при инкубации лимфоцитов от неиммунных доноров в присутствии ряда агентов, вызывающих бласт-трансформацию лимфоцитов. К ним относятся ФГА, стреп-толизин, ксеногенные антитела и антилимфоцитарная сыворотка. Так, при введении ФГА в культуру лимфоцитов, полученных из аденоидов человека, токсические вещества выделяются в среду через 2—3 часа, т. е. задолго до того, как проявляются морфологические изменения в самих лимфоцитах. По мере культивирования (до 96 часов) токсическое действие среды увеличивается. При этом постоянного присутствия ФГА в среде не требуется: для обеспечения продукции токсической фактора достаточно, чтобы ФГА присутствовал в среде 15 минут, а затем был отмыт (Williams, Granger, 1969). Таким образом, в настоящее время известно несколько моделей, позволяющих изучать разрушение клеток-мишеней лимфоцитами in vitro.
1. Разрушение клеток-мишеней под действием лимфоцитов, сенсибилизированных in vivo трансплантационными антигенами мишенеи. Цитотоксическое действие осуществ-
ляется путем непосредственного контакта лимфоцитов и мишеней.
2. Разрушение мишеней цитотоксически ми веществами, которые продуцируются лимфоцитами, сенсибилизированными к посторонним антигенам при их добавлении в культуральную среду.
3. Разрушение клеток-мишеней при контактном взаимодействии с неиммунными лимфоцитами и под действием цитотоксических веществ, которые выделяют такие лимфоциты при обработке ФГА и другими митогенами.
Характерно, что вторая модель позволяет осуществлять цитотоксическую реакцию против сингенных клеток-мишеней.
Естественно поэтому ожидать, что контакт антигена с популяцией клеток, выделенных из лимфоидной ткани сенсибилизированного донора и помещенных в культуру, может оказывать комплексный эффект: часть клеток при этом может стимулироваться к пролиферации, а другая часть — играть роль клеток-мишеней, подвергающихся лизису. В этой связи представляет интерес модель образования колоний фибробластов в монослойных культурах лимфоидных и кроветворных клеток. Как уже указывалось, клетки костного мозга, селезенки и перитонеального экссудата в монослойных культурах образуют колонии фибробластов, которые являются клонами. Каждая из перечисленных клеточных популяций характеризуется своей концентрацией клеток-предшественников для колоний фибробластов. Таким образом, формирование клонов фибробластов происходит в системах, которые имеют в своем составе иммунокомпетентные клетки. Оказывает ли влияние на этот процесс присутствие в среде антигена, если клетки берутся от сенсибилизированного донора? Это было выяснено на модели сенсибилизации к туберкулину.
Клеточные суспензии костного мозга, селезенки и перитонеального экссудата получали от нормальных морских свинок и иммунизированных вНутрикожным введением живой вакцины БЦЖ или подкожным введением полного адъюванта Фрейнда, в который добавляли убитую сухую вакцину БЦЖ (Е. А. Лурия, А. Ф. Панасюк, Г. Н. Кузьменко, А. Я. Фриденштейн, 1971). Культивирование проводили на матрасах Ру на среде 199 с добавлением бычьей сыворотки. В половину культур добавляли туберкулин. На 10—12-й день в культурах подсчитывали число колоний фибробластов.
Таблица 7
