Кроветворная и лимфоидная ткань - Лурия Е.А.
Скачать (прямая ссылка):
Возможно, однако, воспроизвести в культуре первичную реакцию трансплантационного иммунитета целиком — эта задача была выполнена Ginsburg (1968). Лимфоциты крыс
культивировались на подложке, представляющей собой монослой клеток эмбриона мыши. При этом возникали крупные пиронинофильные клетки, которые лизировали подлежащие мышиные клетки. Иммунный ответ, выработанный в таких условиях, отличался строгой специфичностью, что было продемонстрировано переносом иммунной популяции лимфоцитов в другие культуры, где росли клетки мышиных эмбрионов других линий, отличающиеся от первой линии по Н-2 локусу тканевой совместимости.
При культивировании лейкоцитов периферической крови от туберкулинчувствительных доноров (т. е. дающих в ответ на внутрикожное введение туберкулина реакцию ЗПЧ) в присутствии антигена также наблюдается бласттрансфор-мация лимфоцитов. Однако в этом случае она должна быть расценена как вторичный иммунологический ответ. Аналогичные наблюдения сделаны на культурах крови от больных, проявляющих аллергические реакции на антибиотики и другие лекарственные вещества.
В культурах клеток периферической крови больных тяжелой формой шизофрении бласттрансформация происходит при введении в среду антигенов головного мозга, а также и спонтанно (А. Е. Гошева и др., 1969).
Данных по бласттрансформации лимфоцитов людей и животных (предварительно иммунизированных in vivo), возникающей при культивировании в присутствии антигена, в настоящее время накоплено большое количество (см. И. JI. Чертков, А. Я- Фриденштейн, 1968).
Разрушение клеток-мишеней
лимфоцитами in vitro
При совместном культивировании в монослойных культурах лимфоцитов от преиммунизированного донора с живыми аллогенными клетками-мишенями происходит разрушение мишеней (Б. Д. Брондз, 1962, 1964; Govaerts, 1960; Merill a. oth., 1960; Rosenau, Moon, 1961). Цитотоксический эффект оказывают лимфоциты, полученные из различных источников: лимфоциты из ductus thoracicus, из лимфатических узлов, из селезенки, из перитонеального экссудата и периферической крови. Цитотоксическое действие лимфоцитов характеризуется строгой иммунологической специфичностью: лимфоциты оказывают цитотоксический эффект на клетки тех животных, антигены которых были использованы для сенсибилизации донора (Rosenau, Moon, 1961; Wilson,
1963; Holm, 1966). Для осуществления цитотоксического эффекта не требуется присутствия гуморальных антител и комплемента, но нужен непосредственный контакт лимфоцитов с клетками-мишенями. Отделение иммунных лимфоцитов миллипорным фильтром предотвращает лизис клеток-мишеней.
Морфология цитотоксического эффекта подробно изучена (Rosenau, Moon, 1961; Б. Д. Брондз, 1964; Wilson, 1965; МбИег, 1965). В экспериментах Rosenau и Moon к культурам фибробластов мышей С3Н, растущим в лейтоновских пробирках, добавляли лимфоциты от иммунизированных мышей BALB/C. Через 18 часов лимфоциты приходили в контакт с фибробластами, в результате чего последние округлялись, теряли отростки, вакуолизировались. Большинство клеток разрушалось между 18 и 40 часами, при этом гибли не только фибробласты, но и лимфоциты. В дальнейшем было показано, что лимфоциты от иммунизированных доноров оказывают цитотоксический эффект на моиослойные культуры аллогенных опухолей, макрофагов и эпителиальных клеток. Интересны данные по определению времени, необходимого для проявления цитотоксического эффекта. При нанесении лимфоцитов из регионарных лимфатических узлов иммунных крыс на моиослойные культуры клеток-мишеней аллогенной опухоли Wilson (1965) наблюдал прикрепление иммунных лимфоцитов к поверхности мишеней через 7 часов, а через сутки и более обнаруживались деструк+ивные изменения мишеней, которые достигали максимума через 48 часов.
Количество клеток-мишеней, разрушающихся in vitro, зависит от числа сенсибилизированных лимфоцитов, введенных в культуру (Brunner a. oth., 1966; Wilson, 1965,
1967).
В монослойных культурах малой плотности клетки-мишени разрушаются приблизительно за 6 часов (Granger, Weiser, 1964).
При соотношении лимфоцитов и клеток-мишеней, равном 100:1, лизис происходит в течение 2 часов. Используя микрокиносъемку, удалось наблюдать, что один лимфоцит может реагировать с несколькими мишенями, приводя к их лизису и при этом оставаясь жизнеспособным. Для осущест-вления цитотоксического эффекта необходим активный белковый синтез в лимфоцитах. На это указывает подавление цитотоксического эффекта при введении гексамина и акти-номицина D.
Цитотоксический эффект in vitro может быть также подавлен путем добавления 6-меркаптопурина (Wilson, 1965), гидрокортизона (Rosenau, Moon, 1962, 1966) и при действии на лимфоциты ультразвука, прогревания, замораживания и оттаивания (Б. Д. Брондз, 1963).
Введение иммунной сыворотки в культуральную среду снижает или полностью подавляет цитотоксический эффект лимфоцитов на клетки-мишени; в то же время сыворотка от неиммунизированных животных не оказывает на этот процесс никакого влияния (МбИег, 1965). Ингибирование цитотоксического эффекта под действием иммунной сыворотки связано, вероятно, с тем, что гуморальные антитела соединяются с антигенными детерминантами клеток-мишеней, блокируя их и предотвращая взаимодействие с им-мунокомпетентными клетками (МбПег, 1965; Wilson, 1965).
