Кроветворная и лимфоидная ткань - Лурия Е.А.
Скачать (прямая ссылка):
лишь в густой суспензии диссоциированных клеток. Хотя естественная архитектоника селезенки здесь нарушается, высокая концентрация клеток и вращение культур, возможно, обеспечивают осуществление межклеточных взаимодействий в системе.
На это указывает, в частности, тот факт, что для воспроизведения первичного ответа в суспензионных культурах необходимо присутствие двух клеточных фракций селезенки: макрофагов и лимфоцитов (Mosier, 1967). Разделение на фракции, богатые макрофагами и лимфоцитами, проводилось на основе прилипания клеток к пластмассовым чашкам, а культивирование и иммунизация — по методу Mishell и Dutton. Mosier считает, что в этих условиях макрофаги перерабатывают антиген и передают его лимфоцитам. Данные микрокиносъемки подтвердили, что при бляшкообразо-вании происходит контакт определенных типов клеток. 30% бляшек образовывались вокруг двух ассоциированных клеток (Bussard, Lurie, 1967).
На необходимость присутствия макрофагов для осуществления первичного иммунологического ответа in vitro указывают данные по фракционированию суспензии клеток селезенки путем повторной фильтрации через колонку с ватой (Theis, Thorbecke, 1970). В результате этой процедуры из клеточной суспензии удалялась фракция «прилипающих» клеток, что коррелировало с уменьшением способности к иммунологическому ответу in vitro при введении корпускулярных антигенов: бараньих эритроцитов или В. abortus. Интересно отметить, что присутствие макрофагов необходимо не только для осуществления первичного иммунологического ответа на эти антигены, но и для повторного (Theis, Thorbecke, 1970).
Фракция легко прилипающих к пластмассе, стеклу или вате клеток представлена в основном макрофагами, устойчивыми к высоким дозам рентгеновского облучения. Если эти клетки инкубировать in vitro с антигеном — эритроцитами барана, а затем отмыть и совместить с фракцией неприлипающих клеток, то первичный ответ на бараньи эритроциты будет воспроизведен (Pierce, 1969).
Показано, что клетки иммунизированных культур, дающие бляшки, происходят из элементов, митотически размножающихся in vitro, причем S-фаза наступает после 24 часов культивирования (Dutton, Mishell, 1967). Введение Н3-тими-дина в высокой концентрации (обеспечивающей «тимидино-вое самоубийство») способствует избирательной гибели
клеток, синтезирующих ДНК- Если вводить изотоп в течение первых суток культивирования, количество бляшкообразующих клеток не изменяется (не падает). Введение тимидина в период от 24 до 72 часов после начала иммунизации резко снижает число бляшек. Достаточно 8-часового воздействия (от 32-го до 40-го часа) для полного ингибирования бляшкообразоваиия. Таким образом, все антителообразующие клетки возникают в результате деления предшественников, которое начинается через сутки после иммунизации.
К иммунологическому ответу на бараньи эритроциты in vitro способны и клетки перитонеального экссудата, которые представляют собой смешанную популяцию, состоящую из макрофагов и лимфоцитов (Bendinelli, Wedder-burn, 1967).
При краткосрочном культивировании клеток перитонеального экссудата мышей на среде, содержащей карбокси-метилцеллюлозу, бараньи эритроциты и комплемент, можно наблюдать образование зон гемолиза. В течение 24 часов выявляется около 3000 бляшек гемолиза на 106 экспланти-рованных клеток, причем бляшки появляются уже через 15 минут инкубации in vitro. Показано, что гемолиз эритроцитов в этой системе осуществляется под действием специфических антител, которые синтезируются de novo (Bussard а. oth., 1970).
Введение актиномицина блокирует синтез антител, который, следовательно, зависит от синтеза т-РНК. Кинетика гемолитической активности клеток экссудата свидетельствует о том, что увеличение количества бляшкообразующих клеток происходит не за счет пролиферации, но в то же время обусловлено появлением бляшкообразующих новых элементов (Bussard a. oth., 1970). Интересно отметить, что клетки лимфатических узлов, тимуса и селезенки в данных условиях не образуют бляшек гемолиза, а если эти клеточные суспензии культивировать совместно с клетками экссудата, количество бляшкообразующих клеток в последнем снижается. Описанный феномен во многом еще представляет загадку. Речь идет о специфическом иммунологическом ответе. Однако трудно заключить, по какому типу (первичному или вторичному) он протекает.
Если трактовка иммунного ответа на эритроциты представляется спорной, то антителообразование в суспензионных культурах при введении флагеллина Salmonella adelo-ide, безусловно, протекает по первичному типу. Для оценки
интенсивности реакции здесь применялся метод бактериальной иммуноцитоадгезии. Количество антителообразующих клеток достигает максимума на 4-й день после иммунизации. Оно составляет 280 антителосинтезирующих клеток на 106 выживших клеток и на 6-й день падает до 78 клеток на 106 (Diener, Armstrong, 1967).
При низкбй концентрации эксплантйруемых клеток (5X Ю6 на 1 мл) иммунологический ответ не индуцируется, что, вероятно, связано с тем, что в таких условиях не происходит клеточных контактов, обеспечивающих необходимые для иммунизации межклеточные взаимодействия.
