Кроветворная и лимфоидная ткань - Лурия Е.А.
Скачать (прямая ссылка):
Судя по приросту радиоактивности на специфическом иммуносорбенте по сравнению с неспецифическим иммуносорбентом, антителообразование в культурах было достоверным, но незначительным по интенсивности.
Низкий уровень синтеза антител в наших культурах коррелирует с незначительным образованием в них плазматических клеток. Это может быть связано с плохой регенерацией мозгового слоя, в котором в нормальном лимфатичес-
ком узле располагается большая часть плазматических клеток. Вместе с тем корковый слой лимфатических узлов в органных культурах хорошо регенерирует и содержит большое количество живых размножающихся лимфоцитов.
Первичный ответ in vitro удалось получить в органных культурах фрагментов лимфатических узлов и селезенки кроликов, которые инкубировали в течение 2 часов с гемоцианином (McArthur a. oth., 1969). После инкубации антиген отмывали и фрагменты лимфоидных органов помещали на диск из 0,5% агара, окруженный питательной средой, в которую входили среда Игла, витамины, глютамин, 10% кроличьей сыворотки и С14-глицин (1 мккюри/мл).
Антитела в культуральной среде определялись методом пассивной гемагглютинации, радиоиммуноэлектрофореза и специфической копреципитацией. Специфические антитела появлялись на 3-й день и определялись до 20-го дня. Пик антителообразования лежит между 6-м и 12-м днем культивирования (McArthur a. oth., 1969). Таким образом, в последних двух работах (Е. А. Лурия и др., 1966; McArthur a. oth., 1969) получен достоверный первичный ответ на антигены, которые впервые прикладывались к лимфоидной ткани.
Антитела в обоих случаях продуцировались в низких титрах. Индукция первичного иммунологического ответа была достигнута и во взвеси диссоциированных клеток в суспензионных культура*х (Marbrook, 1967; Mosier, 1967; Diener, Armstrong, 1967; Mishell, Dutton, 1966, 1967; Dutton, Mishell, 1967, и др.).
Один из вариантов опытов состоит в помещении на целлофановую мембрану суспензии лимфоцитов в минимальном объеме среды; под целлофаном находился резервуар со средой. При постоянном встряхивании сосуда питательная среда обновлялась и удалялись продукты метаболизма. При культивировании клеток селезенки неиммунизирован-ной мыши на такой диализационной мембране Marbrook (1967) наблюдал первичный иммунологический ответ на эритроциты барана и лошади, которые добавляли к суспензии лимфоцитов. Количество ядерных элементов селезенки, взвешенных в 1 мл среды, составляло 2 X 107 клеток. Питательная среда состояла из среды Игла с добавлением пи-рувата и 10% телячьей эмбриональной сыворотки. Клетки, продуцирующие антитела, появляются на 3—5-й день.
Является ли иммунный ответ на бараньи эритроциты действительно первичным иммунологическим ответом? Этот
вопрос в настоящее время представляется спорным, так как в селезенке неиммунизированных мышей были обнаружены клетки, способные к спонтанному гемолизу бараньих эритроцитов. Playfair с соавторами (1965) нашли, что в селезенке мышей имеется 5 X 103 таких клеток, т. е. 50 клеток на каждые 106 ядерных элементов селезенки. Несмотря на это, ряд авторов придерживаются точки зрения, что иммунологический ответ при иммунизации бараньими эритроцитами протекает по первичному типу, на что указывает преобладание синтеза 19S антител и ингибирующий эффект, который оказывает на антителообразование актиномицин D (Bussard, Lurie, 1967; Robinson a. oth., 1967).
Mishell и Dutton (1966, 1967) проводили культи-
вирование клеток селезенки в пластмассовых чашках, которые подвергались эксцентричному вращению в горизонтальном положении. В состав питательной среды входила среда Игла, 10% эмбриональной телячьей сыворотки и другие компоненты, представляющие, по словам авторов, «питательный коктейль». В чашку помещали 2Х107 клеток селезенки, которые иммунизировали бараньими или лошадиными эритроцитами. Клетки проверяли на антителообразование по методу Ерне, а культуральную среду исследовали на гемолизины. Пик бляшкообразующих элементов достигался на 3—4-й день культивирования. Из миллиона ядерных клеток 103 способны были к бляшкообразованию, т. е. их количество возрастало на три порядка по сравнению с фоном.
Однако в контрольных культурах, в которые не вводили антиген, количество антителосинтезирующих клеток увеличивалось в 100 раз (на два порядка). Возможно, что в Эмбриональной телячьей сыворотке содержится антиген, дающий перекрестную реакцию с антигенами эритроцитов. Это предположение было подтверждено анализом в иммуноэлектрофорезе. В культуральной среде иммунизированных культур обнаруживаются гемолитические антитела в титрах 1:64, 1:16, а в контрольной группе они не продуцируются. Необходимыми условиями для индукции первичного ответа Mishell и Dutton (1967) считают низкое содержание кислорода, легкое встряхивание суспензии, наличие эмбриональной телячьей сыворотки, соответствующую клеточную плотность и ежедневное подкармливание культур. В таких условиях Удается получить иммунный ответ in vitro, который был не на много слабее, чем in vivo. Следует подчеркнуть, что первичный ответ в культурах индуцировался
