Кроветворная и лимфоидная ткань - Лурия Е.А.
Скачать (прямая ссылка):
судить о продукции антител, наблюдая за судьбой бактерий, например за их подвижностью.
На этой модели Nossal показал, что клетки, синтезирующие антитела, принадлежат к серии плазматических клеток, характеризующихся эксцентрически расположенным ядром и высоким содержанием РНК в цитоплазме. Каждая плазматическая клетка, полученная от животного, иммунизированного сразу двумя и более антигенами, способна, как правило, к синтезу только одного типа антител. Лишь некоторые клетки (которые составляют менее 2%) синтезируют одновременно антитела к двум антигенам. В условиях микрокапли плазматическая клетка проявляет синтетическую активность и сохраняет жизнеспособность в течение лишь нескольких часов.
Суспензии лимфоидных клеток от иммунных доноров представляют собой переживающую клеточную популяцию, которая продолжает некоторое время осуществлять синтез антител in vitro. Срок жизни лимфоидных элементов в этих условиях ограничен несколькими сутками. На модели клеточных суспензий проводится в основном биохимический анализ процесса антителообразования и изучение химии антител (А. Е. Гурвич, Г. И. Дризлих и др., 1964; В. Т. Скворцов, А. Е. Гурвич, 1968).
Специальные камеры, предложенные для изучения иммунитета in vitro, позволили получить более длительное переживание суспензии лимфоидных клеток и интенсивный синтез антител (Steiner, Anker, 1956). Суспензия наливается на целлофановую мембрану, установленную над резервуаром с питательной средой. При постоянном встряхивании происходит удаление продуктов метаболизма и обновление питательной среды.
Культивирование фрагментов лимфоидной ткани от иммунных доноров способствует сохранению некоторых лимфоидных структур и дает возможность получить длительный вторичный ответ in vitro. Наиболее благоприятным для синтеза антител является культивирование кусочков лимфатических узлов в плазменном сгустке во вращающихся пробирках. При оптимальных условиях синтез антител удалось наблюдать в течение 4 недель (Michaelides, 1957; Stavitsky, 1961; Michaelides, Coons, 1963, и др.). Интересно отметить, что фаза торможения синтеза антител в культурах оказалась менее выраженной, чем в организме.
Проведено изучение роли ряда факторов в развитии вторичного иммунного ответа в культурах. Оказалось, что со-
став питательной среды оказывает решающее влияние на синтез антител in vitro. Присутствие в среде оптимальных концентраций некоторых аминокислот составляет необходимое условие для антителообразования в культурах (Mountain, 1955; Wolf, Stavitsky, 1958). Добавление к среде витаминов А, К, В12 и токоферола усиливает синтез антител, а введение пуринов и пиримидинов, липидов и углеводов не способствует стимуляции процесса антителообразования (Wolf, Stavitsky, 1958; Alfred a. oth., 1963). Кроме того, культуральная среда должна содержать сыворотку. Кортизон и некоторые другие кортикостероиды, а также инсулин, по ряду наблюдений, могут заменить сыворотку (Ambrose, Coons, 1963; Ambrose, 1964).
Наиболее обстоятельно вторичный иммунный ответ исследован в работах Coons с соавторами. Они изучали развитие вторичного ответа во фрагментах лимфатических узлов кролика, заключенных в плазменный сгусток и помещенных во вращающиеся пробирки. В качестве антигенов использовались BSA — бычий сероальбумин и дифтерийный анатоксин. Фрагменты лимфатических узлов кроликов с выработанной иммунологической памятью высаживали в культуры. Повторная иммунизация проводилась в момент посадки или же в последующие дни культивирования. Антитела в среде определялись методом пассивной гемагглютинации. Оказалось, что самая низкая доза BSA, способная вызвать вторичный ответ in vitro, составляет 1 • 10~9 г/мл (O’ Brien, Mi-chaelides, Coons, 1963).
Было показано, что способность к развитию вторичного ответа на дифтерийный анатоксин сохраняется в культурах в течение 4 дней, а на BSA — около 8 дней. Когда оба антигена используются для повторной иммунизации in vitro, ответ протекает независимо на каждый из них. Пик титров антител наблюдается на 5—8-й день после иммунизации. Синтез антител продолжается около 4 недель. Фаза торможения антителообразования в культурах выражена слабее, чем in vivo. Большая часть клеток, образующих антитела и выявляемых иммуносерологическим методом Кунса, остается в кусочке, хотя некоторые из них обнаруживаются и в зоне роста (O’ Brien, Michaelides, Coons, 1963). Флюоресцирующие клетки начинали появляться на 3-й день. На 4-й день такие элементу широко распространены; большинство из них имело вид незрелых плазматических клеток, а на 8-й день они представлены в основном зрелыми плазматическими клетками.
Было изучено действие 5-бромдезоксиуридина и хлорам-феникола на анамнестический ответ in vitro. Оказалось, что введение 5-бромдезоксиуридина (ингибитора синтеза ДНК) в первые 3—4 дня после иммунизации подавляет вторичный иммунологический ответ in vitro, в то время как его введение в среду после этого периода не оказывает существенного воздействия на синтез антител. Результаты этого исследования указывают, что развитие вторичного ответа в культурах зависит от клеточного деления в течение первых 3— 4 дней после иммунизации (O’ Brien, Coons, 1963).
