Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Лефковитса И. -> "Иммунологические методы исследований" -> 66

Иммунологические методы исследований - Лефковитса И.

Лефковитса И., Перниса Б. Иммунологические методы исследований — М.: Мир, 1988. — 530 c.
ISBN 5-03-0011-70-6
Скачать (прямая ссылка): immunologicheskiemetodi1988.djvu
Предыдущая << 1 .. 60 61 62 63 64 65 < 66 > 67 68 69 70 71 72 .. 239 >> Следующая

Поскольку клетка экспонирует во внешнюю среду большое число разнообразных молекул, первая проблема, с которой сталкивается исследователь, состоит в том, чтобы отличить компонент мембраны, обеспечивающий конкретную функцию, от маркерного продукта, характерного для определенного типа клеток. Решение этой задачи возможно только на основе надежных методов биохимического исследования или функционального анализа мембранных компонентов и клеток, которые их экс-
174 Глава 10
прессируют. Эти методы должны давать возможность выявлять определенные молекулы даже в тех случаях, когда они содержатся в малом числе копий на плазматической мембране клетки. Кроме того, они должны обеспечивать определение ассоциированных друг с другом мембранных компонентов. При выявлении новой мембранной детерминанты ее функциональное значение может стать понятным далеко не сразу. Одним из подходов, способных прояснить физиологическую роль таких детерминант, может служить определение межмолекулярных ассо-циатов на клеточной мембране.
В целом задача этой главы состоит в описании двух различных подходов, которые могут быть использованы для изучения экспрессии молекул на клеточной поверхности. Оба подхода опираются на сходные методы, и их целью являются идентификация, количественное определение и очистка новых, еще не изученных структур. Обсуждаемые здесь методические подходы касаются изучения антигенных маркеров процесса дифференцировки В-лимфоцитов; вместе с тем следует отметить, что они могут быть использованы при изучении экспрессии антигенов клеточных поверхностей для многих других клеточных систем. Ниже будут рассмотрены методы исследования и картирования молекул клеточной поверхности на различных стадиях дифференцировки В-клеток мышей — системы, для которой могут быть созданы хорошо охарактеризованные с точки зрения генетики модели. Мы начали наши исследования антигенных детерминант клеточных поверхностей с анализа клонированных популяций опухолевых клеток, «замороженных» на определенной стадии дифференцировки, а затем распространили их на популяции нормальных клеток свежевыделенных лимфоидных органов. Однако на начальных этапах анализа мы намеренно использовали в качестве удобного и воспроизводимого источника материала лимфомы. Описываемые здесь линии трансформированных лимфоидных клеток мышей были получены первоначально в результате вирусной трансформации или индукции химическими агентами. Все линии клеток, использовавшиеся в этих исследованиях, растут очень быстро (время удвоения от 12 до 20 ч) в стандартных средах для тканевых культур. Каждую из линий культивировали в условиях, которые обеспечивали постоянную доступность для исследований свежеклонированных популяций клеток. Перечень клонов, источники их получения, использованные для трансформации методы и стадии дифференцировки клеток приведены в табл. 10-1. Эти линии были любезно предоставлены нам многими лабораториями, и соответствующая информация о них приведена в предшествующих публикациях (McKearn et al., 1984; McKe-arn, Rosenberg, 1985).
Таблица 10-1. Клеточные линии, использованные в исследованиях
Клеточная Донор Метод трансфор Хар актеристнка
линия мации
40Е1 BALB/c Пре-В-клетки C|X~. xA- S)
А-MuLV»
22D6 BALB/c A-MuLV сц-, v.jy~
40 ЕЗ BALB/c A-MuLV сц-, xA~
41В1 BALB/c A-MuLV сц-, x/X-
38В11 BALB/c A-MuLV C|X_, Y.fK~
220-8 BALB/c A-MuLV CJUL-, Kl%-
204-1-8 BALB/c A-MuLV C|X-, y,l%~
298-18 BALB/c A-MuLV C|X“, 7i/X~
230-238 C57L A-MuLV C|X-, Y,l%-
28С9 BALB/c A-MuLV c|x+, хД-
204-3-1 BALB/c A-MuLV СЦ.+, и/>._
223-18 C57L A-MuLV сц+, У./Х-
230-37 C57L A-MuLV СЦ+, x/>._
АВЕ-8 BALB/c A-MuLV низ>
RAW-8 BALB/c A-MuLV C|A“, x/%-
18-81 BALB/c A-MuLV C|X+, У./Х-
70Z/3 (C57BL/6XDBA/2)F, Нитромочевина |C|j,+, kI%~
В-клеткн с иммуноглобулинами на поверхности
2PK3 BALB/c Минеральное мас- sIgG+, x+
ЛО
WEHI-231 (BALB/c XNZB)F, » sIgM+, x+
WEHI-279 NZC Облучение s!gM+, a+
Клетки илазмацитомы
MPC11 BALB/c Минеральное масло IgG2b, и-секреция
M0PC21 BALB/c » IgGl, я-секреция
S107 BALB/c To же IgA, х-секрецня
J558 BALB/c To же To же
Т-клеткн
WR19L BALB/c A-MuLV Thy-1.2+
BW5147 AKR/J Спонтанная Thy-l.l+
EL-4 C57BL/6 Диметил бензан- Thy-1.2+
грацен
Предыдущая << 1 .. 60 61 62 63 64 65 < 66 > 67 68 69 70 71 72 .. 239 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed