Иммунологические методы исследований - Лефковитса И.
ISBN 5-03-0011-70-6
Скачать (прямая ссылка):
Д. Синтез кДНК................................................62
Е. Циклизация плазмиды с помощью линкера, содержащего
oligo(dG)-концевую последовательность.........................67
Ж. Синтез второй цепи кДНК путем замещения мРНК . . 68
3. Трансформация бактерий плазмидой, полученной на этапе
III, Ж........................................................68
И. Селекция с помощью гибридизации............................69
К. Индукция триптофанового оперона н получение бактериального экстракта............................................69
Л. Скрининг с помощью антител.................................70
IV. Общие замечания..............................................70
A. Метод Хейдекера — Мессинга.................................70
Б. Состыкованные полипептиды..................................72
B. Эукариотическая система....................................72
Литература....................................................73
Глава 4. КОНСТРУИРОВАНИЕ ВЕКТОРОВ ДЛЯ «ОБРАТНОЙ ГЕНЕТИКИ» ИММУНОГЛОБУЛИНОВ (А. Траунекер) ....................................74
I. Введение...................................................74
II. Общая стратегия............................................75
А. Векторы для клеточной трансформации.....................75
Б. Обычно используемые векторы.............................75
III. Материалы и исходные растворы.............................75
IV. Экспериментальные процедуры...............................76
A. Экстракция мнни-плазмид.................................76
Б. Быстрое препаративное получение плазмид.................77
B. Очистка фрагментов ДНК в геле легкоплавкой агарозы 80
Г. Лигирование выделенных фрагментов с соответствующим
вектором...................................................82
Д. Получение компетентных бактерий с помощью СаС1г . . 82
Е. Трансформация компетентных бактерий.....................82
Ж. Стратегия для отбора генетических конструкций ... 83
V. Примеры конструкций.......................................86
А. Конструкции, полученные на основе генов IgM (генов ан-
тн-TNP легкой и тяжелой цепн)..............................86
Б. Работа с клонированными генами in vitro.................86
Литература.................................................86
520 Оглавление
Глава 5. МЕТОДИЧЕСКИЕ ПОДХОДЫ К СИНТЕЗУ ОЛИГОНУКЛЕОТИДОВ (X. Кифер, В. Банварт)...............................................8»
I. Введение.........................................................88
II. Основные принципы синтеза........................................89
A. Твердая фаза..................................................89-
Б. Трнэфнрный метод..............................................90
B. Фосфитный метод...............................................91
Г. Защищенные блоки элонгации....................................92
Д. Удаление защитных групп.......................................93
Е. Синтез вручную на полимерном носителе .... 94
Ж. Синтезаторы...................................................95
III. Экспериментальная часть.............................................97
A. Функционализацня стеклянного носителя.........................97
Б. Отщепление цианэтильной группы от триэфиров мономеров
и днмеров и подготовка к этапу конденсации на носителе- . . 98
B. Активация амиднтов для реакции на носителе .... 99
Г. Активация и связывание днэфиров...............................99
Д. Проведение реакций в условиях полного отсутствия влаги 99
Е. Тритильный анализ.............................................100
Ж. Удаление защитных групп и очистка дезоксирнбоиуклеоти-
дов после синтеза на полимерном носителе.........................100
IV. Реагенты и растворители, которые необходимо очищать или готовить .........................................................102
Литература ......................................................103
Глава 6. ВЫСОКОЭФФЕКТИВНАЯ ЖИДКОСТНАЯ ХРОМАТОГРАФИЯ (ВЖХ) БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ БЕЛКОВ В НАНО-ГРАММОВЫХ (ПИКОМОЛЬНЫХ) КОЛИЧЕСТВАХ (К. Ройтч,
М. Барнес)...................................................104
I. Введение.............................................104
II. Материалы и методы...................................105
A. Оборудование..............................................105
Б. Матрицы для колонок...................................106
B. Определения биологической активности......................106
Г. Аминокислотный анализ.....................................106
