Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Лефковитса И. -> "Иммунологические методы исследований" -> 205

Иммунологические методы исследований - Лефковитса И.

Лефковитса И., Перниса Б. Иммунологические методы исследований — М.: Мир, 1988. — 530 c.
ISBN 5-03-0011-70-6
Скачать (прямая ссылка): immunologicheskiemetodi1988.djvu
Предыдущая << 1 .. 199 200 201 202 203 204 < 205 > 206 207 208 209 210 211 .. 239 >> Следующая

5. Получение клеток костного мозга
1. Овцу анестезируют с помощью внутривенного введения тиопентал-натрия.
2. Выстригают и дезинфицируют грудную зону или бедро животного.
3. Для проведения стернальной пункции на груди делают разрез длиной 2 см и вводят через него заборную иглу под прямым углом к грудине. Разрез нужно делать потому, что толстая подкожная ткань над грудиной препятствует доступу к грудине при использовании обычной стернальной иглы. Мы используем специальные иглы Климана, предназначенные для пункции костного мозга, которые имеют стилет и регулируемый стопор. Для пункции из подвздошной кости разрез можно не делать.
4. Когда конец иглы достигает надкостницы, стопор на игле устанавливают так, чтобы иглу можно было ввести еще примерно на 5 мм.
454 Глава 24
5. Иглу проталкивают сверлящим движением в полость кости. При достижении полости, где содержится костный мозг, ¦сопротивление движению иглы вперед резко снижается.
6. Стилет вынимают и шприцем на 5 мл с плотно притертым поршнем набирают не более 0,3 мл костномозгового вещества.
7. Его выдавливают в пробирку, содержащую среду RPMI 1640 с 0,02% ЭДТА-Na. Затем в шприц набирают небольшое количество этой среды и содержимое также вливают в пробирку.
8. Отбор костного мозга из грудины производят до тех пор, пока не накапливается необходимое количество клеток костного мозга. Точки повторных пункций должны находиться на расстоянии не менее 1 см друг от друга. Описанным способом клетки костного мозга можно получать также из подвздошной кости.
9. Разрез на коже закрывают с помощью зажимов Мишеля.
6. Постоянное получение образцов крови и лимфы от плодов овцы
При плодной хирургии необходимы особенно тщательные меры по сохранению стерильности.
•я. Получение лимфы
из пред лопаточного лимфатического узла плода
Этот метод, разработанный Кэхиллом и др. (Cahill et al., 1979), позволяет длительно получать лимфоциты от плодов в возрасте 100 дней или больше. Плод канюлируют in utero за 1—2 нед до ожидаемой даты рождения. Извлечение плода в конце нормальной беременности (примерно 150 дней) путем кесарева сечения позволяет сохранить функционирующую канюлю и после рождения. Благодаря этому возможно получение лимфоцитов от одного и того же животного до и после рождения.
1. Овцу наркотизируют, как описано выше.
2. Животное располагают в позиции для литотомии, выстригают шерсть и дезинфицируют поверхность брюшной полости, которую накрывают стерильными салфетками, оставляя открытым только участок, на котором будет сделан разрез.
3. Проникают в брюшную полость через парамедианный разрез, вынимают матку и располагают ее на животе овцы таким образом, чтобы не вызвать скручивания сосудов.
Овца как экспериментальная модель
45S
4. Матку накрывают тонким стерильным полиэтиленовым пакетом, который должен покрывать ее полностью. Это помогает предохранить ее от высыхания во время операции. Осторожной пальпацией определяют положение плода в матке.
5. В полиэтиленовом пакете проделывают небольшое отверстие и с помощью электроскальпеля делают надрез на поверхности матки (длина надреза 5 см) в месте, где соединяются амнион и аллантоис. Следует избегать повреждения крупных кровеносных сосудов и ворсинок плаценты.
6. Плодные оболочки разрезают ножницами и прикрепляют их края к стенке матки с помощью зажимов Эллиса.
7. Выводят наружу переднюю конечность зародыша. Потери амниотической жидкости можно свести к минимуму за счет правильного расположения плода. Для поддержания влажности плода на него накладывают смоченные в солевом растворе марлевые тампоны.
8. Выделяют и канюлируют эфферентный проток предлопа-точного лимфатического узла плода тем же способом, который был описан для взрослых животных. Протоки 130—140-суточных плодов несколько крупнее, чем торакальные лимфатические протоки взрослых крыс.
9. Через отверстие в коже плода вводят катетер и делают несколько фиксирующих швов на коже шеи, чтобы канюля оказалась в петле с учетом роста зародыша.
10. Переднюю конечность плода возвращают в полость матки. При этом нужно тщательно следить за тем, чтобы не были порваны плодные оболочки.
И. Небольшой отрезок трубки (примерно 20 см) оставляют внутри амниотической полости, для того чтобы обеспечить возможность движений плода. Края плодных оболочек собирают в месте разреза и накладывают на них круговую лигатуру.
12. Стенки матки стягивают несколькими прямыми лигатурами, а затем накладывают непрерывный матрасный шов выворачивающими стежками, так чтобы рана оказалась погруженной в интактные ткани матки. Это помогает избежать слипания матки с кишечником или стенкой брюшной полости.
13. Канюлю выводят наружу, пропуская ее через прокол в правом боку овцы-матери. В брюшной полости оставляют свободную петлю канюли.
14. Зашивают брюшную полость и делают прооперированному животному ежедневные инъекции антибиотиков в течение трех дней.
Предыдущая << 1 .. 199 200 201 202 203 204 < 205 > 206 207 208 209 210 211 .. 239 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed