Иммунологические методы исследований - Лефковитса И.
ISBN 5-03-0011-70-6
Скачать (прямая ссылка):
4. Мягко оттягивают назад поршень шприца и перемещают иглу до тех пор, пока кровь не начнет поступать в шприц.
5. Осторожно ведут иглу вверх по вене и, оттягивая поршень шприца назад, .набирают требуемое количество крови.
6. После отбора необходимого количества крови быстро выдергивают иглу и большим пальцем в течение 10—20 с с силой надавливают место прокола вены. Если этого не сделать, возможно образование гематомы, что затруднит повторный забор крови.
Б. Хирургические процедуры
1. Подготовка к операции и наркоз
В ночь перед операцией животных лишают корма. При правильном содержании овец каких-либо предварительных медицинских процедур не требуется.
1. Обычно используют общий наркоз с внутривенным вливанием пентотала (Abbot, тиопентал натрия) в объеме 12— 16 мл. Следует избегать применения пентобарбитала натрия или нембутала (Abbot), так как большинство имеющихся в продаже препаратов содержат консерванты, вызывающие значительный гемолиз с последующей гематурией. Первые 6— 8 мл тиопентала натрия вводят быстро, а остальной объем более медленно, до тех пор пока не будет достигнута необходимая глубина наркоза. Если в ходе хирургической операции необходимо внутривенное вливание, то в шейную вену вводят мягкий катетер типа канюли 18G Venflon (Viggo, Швеция).
2. Для того чтобы избежать аспирации отрыгиваемой желудочной жидкости, животное интубируют.
а. Основание языка отдавливают вниз ларингоскопом, снабженным лампочкой и длинным лезвием.
б. Проводят эндотрахеальную трубку с пластмассовой манжетой над лезвием ларингоскопа и вставляют ее в трахею между голосовыми связками. Обычно для придания жесткости в просвет эндотрахеальной трубки помещают металлический стержень, что облегчает ее введение.
в. Подавая воздух, надувают манжету на конце трубки, а ее внешний конец привязывают к нижней челюсти бинтом. Не допускают слишком сильного накачивания манжеты.
•Овца как экспериментальная модель
449
г. Убеждаются в том, что трубка вставлена в трахею, а не в пищевод. Для этого перед внешним концом трубки держат двумя пальцами клочок шерсти и в это время резко сдавливают грудь (не живот) овцы. Шерсть должна отклоняться потоком воздуха при каждом нажатии. При работе с ягнятами внутривенное введение пентотала обеспечивает создание и поддержание наркоза для стандартных хирургических операций. Состояние наркоза у взрослых животных надежнее поддерживать с помощью анестезиологического аппарата (закрытого типа), подающего фторотан1) и кислород через эндотрахеальную трубку.
2. Канюлирование эфферентного
протока подколенного лимфатического узла
Метод, разработанный Холлом и Моррисом (Hall, Morris, 1962), позволяет получать лимфу из одиночного лимфатического узла животного, находящегося в нормальном физиологическом состоянии в течение длительного времени, в количествах, отбор которых не представляет угрозы для его здоровья. С помощью этого метода показано, что подавляющее большинство лимфоцитов, поступающих .из лимфатических узлов, имеет гематогенное происхождение (Hall, Morris, 1963).
1. Электрической машинкой удаляют шерсть с участка, на котором будет производиться операция, и тщательно протирают кожу на этом участке 70%-ным спиртом, содержащим 1% реагента Hibitane. Животное целиком .покрывают стерильной тканью, оставляя свободным только участок, на котором будет проводиться операция.
2. На бедре (на 4—5 см ниже седалищного бугра) делают вдоль заднего края ноги разрез длиной 10—15 см.
3. Продольно разделяют соединение между мышцами m. biceps femoris и m. semitendinosus. Рассекают и лигируют пару внутримышечных кровеносных сосудов и обнажают подколенную впадину с помощью самофиксирующегося ретрактора. Эфферентный проток подколенного лимфатического узла обычно расположен в непосредственной близости от vena saphena lateralis и может быть отделен от жировой ткани в подколенной впадине (рис. 24-4). Обнаружение лимфатического протока облегчается, если с боковой стороны плюсны (участок, дренируемый этим лимфатическим узлом), т. е. между щет-
¦> Фторированный углеводород; синонимы: галотан, галотанум, анестан, наркотан. — Прим. ред.
450 Глава 24
Рис. 24-4. Канюлирование эфферентного протока подколенного лимфатического узла. Детали см. в тексте.
койп и скакательным суставом, ввести 0,25%-ный раствор синьки Эванса (0,5 мл).
4. На проток накладывают шелковую лигатуру и отделяют его от соединительной ткани. В случае нескольких протоков лигируют все и выбирают самый большой из них. Ниже первой лигатуры на проток накладывают (не затягивая) вторую.
5. Лимфатический сосуд между двумя лигатурами надрезают остроконечными ножницами и вводят в проток виниловую канюлю подходящего диаметра (она должна быть предварительно заполнена гепаринизированным солевым раствором для предотвращения образования сгустков). Мы используем канюли Dural Plastics (NSW, Австралия). Для наших целей пригодны также канюли SV 45 Dural Plastics (внутренний диаметр
