Иммунологические методы исследований - Лефковитса И.
ISBN 5-03-0011-70-6
Скачать (прямая ссылка):
Описанные исследования проводились в течение последних двадцати лет. Разработка гибридомной технологии получения моноклональных антител к поверхностным маркерам лимфоцитов овец позволяет в настоящее время более полно охарактеризовать субпопуляции их лимфоцитов (Miyasaka et al., 1983). Дальнейшие исследования субпопуляций лимфоцитов in vivo
Овца как экспериментальная модель
445
и in vitro должны прояснить вопросы их онтогенеза, путей миграции и функциональной роли лимфоцитов в иммунитете.
В этой главе мы рассмотрим лишь иммунологические методы, тогда как более общие вопросы исследований с использованием овец обсуждаются в работах Хекера (Hecker, 1974, 1983).
II. СОДЕРЖАНИЕ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫХ ОВЕЦ
Хотя овцы являются послушными и дружелюбными животными, они легко впадают в состояние стресса и им постоянно необходимы уход и забота. Мы обычно содержим овец в полевых условиях. За несколько дней до проведения опытов животных переводят в загон. Для идентификации животных их метят, прикрепляя на ухо металлический ярлык; с этой целью можно также использовать краску. Наш загон для овец представляет собой большое помещение с цементным полом, который покрыт сеном и соломой. Подстилку меняют каждую неделю, а свежую питьевую воду и корм (имеющиеся в продаже брикеты) дают овцам ad libitum. В виварии установлены кондиционеры и ,в течение всего года поддерживается температура 20 °С. Овец стригут весной и осенью. Каждые два или три месяца необходимо подрезать копыта, что легко делать, используя садовые ножницы. Овец, предназначенных для операции, за 2—3 дня переводят в специальные клетки и выдерживают без пищи в течение ночи перед операцией. Клетки сконструированы таким образом, что животные .могут в них свободно сидеть и стоять, но не поворачиваться. Емкости для воды и корма располагаются в передней части клетки (рис. 24-1), а моча и экскременты поступают сквозь дно из проволочной сетки в контейнер в задней части .клетки. Клетки описываемого типа очень удобны при проведении внутривенных вливаний и постоянного отбора образцов крови и лимфы. Животных можно содержать в таких клетках в течение ,нескольких недель без явных проявлений дискомфорта. Поскольку овцы являются стадными животными, мы всегда помещаем в той же комнате (в отдельной клетке) вторую овцу. Более детально содержание овец описано в учебнике UFAW (UFAW Handbook, 1971, 1972) или в книге Хекера (Hecker, 1983).
III. ПРОЦЕДУРЫ
А. Забор крови
Залог успешного забора крови — хорошая фиксация животного. Его удерживают за шею, заднюю ногу или туловище. Выполняя этот прием, (не следует захватывать шерсть, так как
446 Глава 24
Рис. 24-1. Клетка для содержания овцы. Емкости для воды и пищи расположены в передней части клетки. Моча и экскременты через дно, сделанное из проволочной сетки, попадают в воронкообразный контейнер, расположенный в задней части клетки.
при этом овцы пытаются вырываться. Мы используем следующие приемы для фиксации животных и забора крови.
1. Фиксация
1. Овцу загоняют в угол.
2. Спокойно приближаются к ней и захватывают ее левую заднюю ногу правой рукой. После этого обхватывают левой рукой шею животного.
3. Захватив овцу таким образом, левую руку кладут на крестец, а правой рукой обхватывают ее челюсти (рис. 24-2). Осторожно отводят голову овцы от себя по направлению к хвосту.
4. Одновременно надавливают на крестец сверху вниз. Это заставляет овцу перевалиться через колено и занять сидячее положение.
5. Овцу подтягивают к себе так, чтобы она опиралась на крестец, и, удерживая животное между ногами, осторожно
Овца как экспериментальная модель
447
Рис. 24-2. Фиксация животного. Ле- Рнс. 24-3. Забор крови у овцы. Шей-
вая рука располагается иа крестце, ное углубление представляет собой
а правой рукой обхватывают челюсти борозду, располагающуюся медиаль-
овцы. Детали см. в тексте. но по отношению к брахиоцефальной
мышце, которая выступает при повороте головы животного. Детали см. в тексте.
отклоняют его голову в правую сторону. Если голову овцы держать достаточно крепко, она не будет больше сопротивляться. В таком положении левая сторона шеи достаточно доступна, и животное готово для забора у него образцов крови.
2. Забор крови
1. Ассистент должен опуститься на колени возле обездвиженной овцы и электрической машинкой удалить шерсть на левой стороне шеи. Освобожденный от шерсти участок кожи дезинфицируют 707о-ным спиртом, содержащим 1% реагента Hibitane.
2. Большим пальцем левой руки слегка надавливают в области шейного углубления около груди. Шейное углубление представляет собой борозду, расположенную медиально по отношению к брахиоцефальной мышце, которая выступает при повороте головы животного (рис. 24-3). Этот прием способствует выявлению яремной вены и препятствует ее перемещениям. Не спеша находят вену и исследуют ее ход осторожной пальпацией.
448 Глава 24
3. Держа шприц между большим, средним и указательным, пальцами, резким движением снизу вверх прокалывают кожу иглой под минимально возможным углом по отношению к вене.. Для взрослых животных используют иглу № 18, а для ягнят — иглу № 21.
