Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Лефковитса И. -> "Иммунологические методы исследований" -> 196

Иммунологические методы исследований - Лефковитса И.

Лефковитса И., Перниса Б. Иммунологические методы исследований — М.: Мир, 1988. — 530 c.
ISBN 5-03-0011-70-6
Скачать (прямая ссылка): immunologicheskiemetodi1988.djvu
Предыдущая << 1 .. 190 191 192 193 194 195 < 196 > 197 198 199 200 201 202 .. 239 >> Следующая

Эту операцию можно выполнять между 56 и 72 ч инкубации (Fitzimmons et al., 1973). При определенном навыке добиваются вылупления 10% оперированных зародышей, из которых, однако, только 10^% живут более одной недели после вылупления. Хотя выжившие птицы полностью лишены фабрициевой сумки, они сохраняют некоторое количество В-лимфоцитов и определенный уровень иммуноглобулинов в сыворотке крови; тем не менее такие животные не способны вырабатывать специфические антитела к широкому кругу антигенов (Grantors et al., 1982). Мы описываем модифицированный способ (Grantors et al., 1982) выполнения этой операции. Предварительно протерев поверхность скорлупы 70%-ным этанолом, удаляют ее квадратик площадью 1 см2 на том конце яйца, где располагается воздушная камера. Затем стерильным заостренным пинцетом удаляют с хориоаллантоиса мембрану и настраивают стереомикроскоп на зародыш. Используя стерильные глазные (для иридэктомии) ножницы, разрезают халазообра-зующий слой над хвостовой областью. Отрезают и удаляют конец хвоста ниже зачатков конечностей. На область разреза наносят одну-две капли яичного белка. Яйцо заклеивают липкой лентой и инкубируют без переворачивания.
Ж. Поздняя хирургическая бурсэктомия
Если у 17-суточных зародышей удалить фабрициеву сумку, то можно получить птиц, полностью лишенных В-клеток. Операция описана в деталях (Weir, 1973), и ниже перечислены ее основные этапы в слегка модифицированной форме. Вылупляе-мость после операции достигает 40%. Напротив того места, где при просвечивании выявляется наибольшее затемнение от зародыша и желточного мешка, на 2/3 расстояния по направлению к острому концу яйца отмечают 1 см2 поверхности, протирают его 70%-ным этанолом и прорезают скорлупу. Осторожно удаляют подскорлуповую оболочку (стерильным заостренным пинцетом), прокалывают хориоаллантоисную мембрану (избегая кровеносных сосудов) и стерильным пинцетом извлекают хвостовой отдел зародыша. Кожу прокалывают заостренным пинцетом дорсальнее клоаки и расширяют разрез до 3 мм в длину. Фабрициевую сумку вынимают через этот разрез и удаляют (если нужно, перерезая проток, соединяющий ее с кишкой). На разрез наносят каплю яичного белка и возвращают зародыш на место. Яйцо заклеивают клейкой лентой и инкубируют без переворачивания.
Зародыши птиц в иммунологии
431
3. Реакции «трансплантат против хозяина»
1. Оценка спленомегалии
Спленомегалия является количественной мерой реактивности иммунокомпетентных лимфоцитов против зародышевых антигенов гистосовместимости (Simonsen, 1970). Лимфоциты обычно получают из гепаринизированной периферической крови взрослых животных и выделяют низкоскоростным центрифугированием, как описано в гл. 22. Их промывают один раз ЗФР (или другой подходящей средой) и суспендируют до концентрации
1—2-107 клеток/мл. 13- или 14-суточным зародышам вводят внутривенно 0,1 мл суспензии. Для каждой экспериментальной точки следует брать по 4—5 зародышей. При желании можно титровать число вводимых клеток. Контрольной группе зародышей инъецируют среду, не содержащую клеток. Спустя 5 суток удаляют и взвешивают селезенки зародышей. Данные обычно представляют как среднеарифметическое десятичных логарифмов массы селезенок. Эта величина обычно составляет около 2 в том случае, когда взрослый донор клеток периферической крови и зародыш-реципиент гистонесовместимы (масса селезенок в опыте составляет 50—120 мг, а в контроле—10— 20 мг). Если донор и реципиент гистосовместимы, то спленомегалии обычно не наблюдается. Однако были обнаружены исключения из этого правила, причем показатель спленомегалии в этом случае доходил до 1,8 (Simonsen et al., 1977). Дополнительные сведения о типе клеток, пролиферирующих в процессе развития реакции «трансплантант против хозяина», о числе клеток, необходимом для индукции спленомегалии, и о генетической основе этой реакции можно найти у Симонсе-на (Simonsen, 1970).
2. Подавление сплеономегалии
Инкубация клеток донора перед инъекцией с соответствующей антисывороткой подавляет спленомегалию. Ингибирующее действие оказывает ксеноантисыворотка к Т-клеткам и аллоантисыворотка В-F (МНС класса I). Антисыворотки к иммуноглобулинам— В-L (МНС класса II) и В-G (МНС класса IV) — не ингибируют спленомегалию (Lydyard, Ivanyi, 1974; Simonsen et al., 1977). Для проведения теста на подавление спленомегалии готовят аликвоты клеток донора (например, 5-106 в 1 мл) так, как описано выше, и выдерживают их 20 мин во льду в присутствии нескольких подходящих разведений (например, от 5 до 0,1%) сыворотки, тестируемой на ингибирующую активность. После инкубации клетки вместе с антисыво-
432 Глава 23
роткой вводят в зародыш (0,1 мл); промывка клеток не обязательна.
Этот тест является чувствительным индикатором способности антител связываться с Т-лимфоцитами. Механизм, лежащий в основе подавления спленомегалии, вероятно, заключается в том, что клетки, покрытые антителами, поглощаются печенью зародыша (Lydyard, Ivanyi, 1974; Pink, неопубликованные данные). Тем не менее не все антитела, реагирующие с Т-лимфоцитами донора, оказывают ингибирующее действие; например, моноклональные антитела L17 (Pink, Rijnbeek, 1983) не подавляют спленомегалию, хотя связываются с лимфоцитами периферической крови, судя по результатам иммуно-флуоресцентного теста (Pink, Hala, неопубликованные данные).
Предыдущая << 1 .. 190 191 192 193 194 195 < 196 > 197 198 199 200 201 202 .. 239 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed