Иммунологические методы исследований - Лефковитса И.
ISBN 5-03-0011-70-6
Скачать (прямая ссылка):
вать временный подъем давления в зародыше, возникающий в результате инъекции, в скорлупе над воздушной камерой просверливают небольшое отверстие.
После инъекции отверстие заклеивают небольшим кусочком липкой ленты, которую накладывают непосредственно поверх
28*
428 Глава 23
подскорлуповой оболочки (нет необходимости возвращать на свое место удаленный участок скорлупы). В одну и ту же вену можно сделать до четырех инъекций, каждый раз удаляя липкую ленту и вновь заклеивая ею отверстие. После инъекции яйца инкубируют обычным способом (с переворачиванием).
Сходным образом из вены могут быть отобраны образцы крови. В этом случае иглу следует вставлять в направлении, противоположном току крови. С помощью этого метода удается отбирать до 0,3 мл крови. При перфузии яйца можно получить около 0,5 мл крови. Для выполнения этой операции нужно ввести иглы в вены, расположенные на противоположных сторонах яйца. Одну иглу присоединяют к капельнице с физиологическим раствором, содержащим 5 ед. гепарина на 1 мл, а через другую иглу собирают кровь. Полный объем крови в 12-су-точном курином зародыше составляет около 1,5 мл (Rychter et al., 1955).
В. Подавление выработки аллотипов
и классов иммуноглобулинов
Для подавления выработки одного из аллотипов IgM в гетерозиготном по аллотипам зародыше на 12, 13 и 14-е сутки инкубации в него внутривенно вводят по 0,1 мл неразбавленной антиаллотипической сыворотки (стерильной и предварительно осветленной центрифугированием в высокоскоростной центрифуге). Это приводит к длительному подавлению соответствующих аллотипов IgM и связанных с ними аллотипов IgG (Ratcliffе, 1984). Таким способом невозможно подавить выработку IgM у птиц, гомозиготных по аллотипам. Последнего, однако, можно добиться (Kincade et al., 1970) введением больших доз (2 мг) аффинно-очищенных козьих антител к ^-цепям зародышей кур на 13-е сутки инкубации с последующей бур-сэктомией вылупившихся цыплят (Weir, 1973). Механизм супрессии в этих двух случаях может быть различным. Одни авторы (Ratcliffe, Ivanyi, 1981) не обнаружили каких-либо указаний на участие в этом процессе клеток-супрессоров и предположили, что происходит долговременное истощение популяции аллотип-специфических клеток. Другие (Kermani-Arab, Leslie, 1978) показали, однако, что супрессорные клетки по крайней мере частично ответственны за агаммаглобулннемию бурсэктомированных цыплят, получавших перед этим козьи анти-^М-антитела. Воздействие антителами против иммуноглобулинов с последующей хирургической бурсэктомией в момент или непосредственно перед вылуплением следует использовать в тех случаях, когда важно гарантировать нормальное функционирование Т-клеток цыплят (которое может подавляться циклофосфамидом или тестостероном).
Зародыши птиц в иммунологии
429
Г. Обработка циклофосфамидом
Введение циклофосфамида зародышам или только что вылупившимся цыплятам (гл. 22) приводит к затяжной недостаточности В-клеточной системы. У обработанных таким образом животных В-лимфоциты отсутствуют или имеются лишь в очень незначительном количестве в фабрициевой сумке и в периферических тканях. Уровень сывороточных иммуноглобулинов, особенно IgG, обычно очень низок (иногда ниже предельных концентраций, которые еще можно выявить). Вместе с тем IgM в сыворотке крови некоторых птиц могут присутствовать в нормальных количествах (Escola, Toivanen, 1974).
Циклофосфамид вводят зародышу внутривенно (разд. III, Б) в течение трех дней, начиная с 15-х суток инкубации. Препарат циклофосфамида должен быть приготовлен непосредственно перед введением (Осторожно! Это вещество ядовито!) в соответствии с инструкцией изготовления (например, растворением в дистиллированной воде до концентрации 10 мг/мл). Вводят 1—1,5 мг (0,1 мл) на зародыш [точная доза определяется линией кур: более мелкие зародыши (например, линий СВ или
Н.В14) чувствительнее к токсическому действию препарата, чем более крупные (например, линий Н.В15 или Н.В21)]. Инъецированные яйца можно инкубировать обычным способом. Количество В-лимфоцитов и способность к гуморальному иммунному ответу у зародышей, обработанных циклофосфамидом, восстанавливаются инъекцией им клеток зародышевой фабрициевой сумки (Lassila et al., 1979).
Д. Обработка тестостероном
Обработка зародышей тестостеронпропионатом приводит как к атрофии эпителиальных кльлж фабрициевой сумки, так и к уменьшению числа периферических В-лимфоцитов и В-лимфоцитов сумки. Иммуноглобулины в сыворотке обнаружить не удается, или же их уровень низок (хотя в некоторых случаях уровень IgM соответствует норме или даже выше) (Warner et al., 1969), а разнообразие легких цепей уменьшается (Huang, Dreyer, 1978). Обработка заключается во введении 0,1 мл раствора, содержащего 4 мг тестостеронпропионата под хориоал-лантоисную мембрану 11- или 12-суточного зародыша. Тестостерон растворяют (40 мг/мл) непосредственно перед введением в арахисовом или кукурузном масле и стерилизуют 2—3-кратным кипячением в течение 15 мин в водяной бане.
430 Глава 23
Е. Ранняя хирургическая бурсэктомия
