Иммунологические методы исследований - Лефковитса И.
ISBN 5-03-0011-70-6
Скачать (прямая ссылка):
Кортикальные тимоциты Peault et al., 1982; Pink,
Rijnbeek, 1983; Chen et
al., 1984
Vh-Рэйон Ig (идиотип) Chanh et al., 1982
ц-Цепь Ig Chen et al., 1982; Benedict
(не опубликовано)
Эндотелиальные и гемопоэтические клетки (за ис Peault et al., 1983
ключением эритроцитов) перепела
Незрелые миелоидные клетки Kornfeld et al., 1983
Миелоидные и Т-лимфоидные клеткн
Миелоидные, Т- и В-лимфоидные клетки
Миелоидные, Т-лимфоидиые н эритроидные
клетки
Гемопоэтические клетки, за исключением эрит
роцитов
Миелоидные и В-лимфоидиые клетки Pink, Rijnbeek, 1983
Гемопоэтические клетки, за исключением эри
троцитов
Аллоантигеи В-лимфоцитов (Ви-1а)
Антигены МНС класса II (В---L) Ewert, Cooper, 1983
Антигены МНС класса I (В---F) Longenecker (не опубли
ковано) ; Siraonsen (не
опубликовано)
которых удовлетворяет потребностям большинства лабораторий (до 2000 яиц). В инкубаторе яйца должны автоматически переворачиваться, однако разумно выбрать такую модель прибора, в котором некоторые яйца (например, после операции)
28—1278
426 Глава 23
можно инкубировать без переворачивания. Период инкубации составляет 21 сутки; после 19 суток яйца следует перенести в отдельную секцию или отдельный инкубатор для вылупления. С помощью лампы для просвечивания можно проверить, оплодотворено ли яйцо и как идет его развитие. Такую лампу можно либо приобрести, либо смастерить в лаборатории, поместив электрическую лампочку на 40 Вт внутрь деревянного ящика, в котором проделано отверстие для яйца (Payne, 1972). Просвечивание проводят в затемненной комнате.
Б. Высверливание скорлупы, инъекции и забор крови
Для внутривенных введений, которые легко выполнимы в промежутке между 10-ми и 17-ми сутками инкубации, при просвечивании определяли локализацию крупной вены около края воздушной камеры. Вены можно отличить по плавности их контуров и по ветвлению в направлении от воздушной камеры. Кровь течет в направлении воздушной камеры, на краю которой сосуд поворачивает внутрь яйца. Инъекцию следует делать в направлении тока крови.
На скорлупе поверх вены отмечают карандашом треугольный (со стороной 1 см) или прямоугольный (1x0,5 см) участок поверхности. Скорлупу вокруг отмеченного участка прорезают диском из карборунда или металла, закрепленным в зубоврачебной бормашине (рис. 23-1). Скорость вращения диска должна быть контролируемой (например, с помощью ножной педали). Удобно, кроме того, приспособить вентилятор, сдувающий мелкие частицы скорлупы, образующиеся во время этой операции. Вырезанный участок скорлупы снимают с подлежащей подскорлуповой оболочки пинцетом (рис. 23-1, ?); прорезание скорлупы не должно приводить к повреждению хориоал-лантоисной мембраны. Если эта мембрана не перфорирована, то зародыши способны пережить небольшую потерю крови из поврежденного сосуда.
Для того чтобы сделать обнаженную подскорлуповую оболочку прозрачной, на ее поверхность помещают каплю парафинового масла. Теперь вена отчетливо видна и без просвечивающей лампы, тем не менее и в этом случае весьма удобным оказывается приспособление, показанное на рис. 23-1, В, с помощью которого можно одновременно фиксировать и освещать яйцо. После того как яйцо закреплено в таком приспособлении или в обычной подставке для яиц, можно делать инъекцию, пользуясь туберкулиновым шприцем объемом 1 мл и иглой № 30. Кончик иглы слегка загибают вверх, чтобы он входил в вену под наиболее возможным тупым углом. Вводимый объем должен составлять 50—150 мкл; для того чтобы скомпенсиро-
Зародыши птиц в иммунологии
427
Рис. 23-1. Подготовка яйца для внутривенного введения. А. На просвет определяют направление тока крови в отмеченной подходящей вене и с помощью зубоврачебного диска вырезают над ней прямоугольный участок скорлупы. Б. Вырезанный участок удаляют пинцетом. В. На подскорлуповую оболочку помещают каплю парафина и просвечивают яйцо в специальном аппарате, сконструированном Камбером (Kamber) в Базельском институте иммунологии. При просвечивании вена очень хорошо видна.
