Иммунологические методы исследований - Лефковитса И.
ISBN 5-03-0011-70-6
Скачать (прямая ссылка):
f't sf 't чТ nJ л.»*!-» IT) tO tO tOiOtOtO to Ю Ю Ю О о ¦ооооо О 'Г О ГЧ гч Гч ГЧГЧ ГЧГЧ гч гч ГЧ Ч) Ф <0 <о
N<C№OH .н«м»0*ГЮ ООГЧсОО OHHfjn 'f Ю ООГч «Ооо ои rjto ~Я лп Ots |ч«00 ffOHHW <0<0
-J st st ЮЮ 10 iO Ю *010 ЮЮЮЮЮ ¦0 0 0 -о 0 ооооо <1 О ГчГч Гч Гч ГчГч ГЧГЧ Гч |ч (4 Гч гч Гч <0 <0 <0 <0
(OffOHN n<t ююо NOffOr) wrt-j-jui О Гч «о о О r-««V»0 4t Ю of4- «ОО'О Г-1 fSJ »OnJ ю ОГЧ <000 pH П
nn s» J '1'J-t't't ¦tf »J -J IO to i/l 10 i/l i/l iO ЮЮ ююо 00-000 ОО О «Гч Гч Гч Гч Гч Гч Гч Гч |4 Гч <0 <0 <о
Гч <0 <0 0-0 ^4 ГJfO »0 st Ю014 <o<0 OOHNI1 П>1 ЮОГЧ г- <0 о о о ^««МЮгОч» ЮО ors<0 ОО ООН pH pH
J'J't'Ilfl iO «0 ЮЮ «0 IO 10 to to to tOooO -o ООООО -О О О Гч Гч ГчГч Гч ГчГч Гч ГчГчГчГч Гч Гч <0 tO tO «0<0
tOOCT»Orl 'j’i'j -t<t Ofstfjoo r-*«4rO<» tO Ю ОГч «0 О Or-««SJ»0sf Ю -О Гч«00 О pH *\J М ЮОГЧ <00 о и
rOlOfOs» s» •J-J lOiOiOtOlO ю ю io ю ю ооооо ООООО Гч ГчГчГчГч ГчГч ГчГч 14 <0<0
OHWI'I't loops <IO- ОНМП4 •OO^fOO* ОМ NrOs* ЮОГЧ «Оо OHfJrOSt Ю О Г4 «О о О рНЛ»Ю >» юо
Ю Ю ЮЮ Ю U)i/)iOU1'Q OOOOO OOOOO Гч ГЧ ГЧ Гч. ГЧ Гч Гч Гч Гч гч «0 <о «0 «О tO о о <о «о <о ооооо оси
410 Глава 21
Литература
Diem К-, ed. (1962). Documenta Geigy, Scientific Tables. Geigy Base Basel.
Henri C., Marbrook J., Van D. C., Kodlin D., Wofsy C. (1980). In: Selected Methods in Cellular Immunology (В. B. Mishel, S. M. Shiigi, eds.), p. 138, Freeman, San Francisco.
Lefkovits 1. (1979). In: Immunological Methods (I. Lefkovits, B. Pernis, eds.), vol. 1, p. 355, Academic Press, New York.
Lefkovits I., Waldman H. (1979). Limiting Dilution Analysis of Cells in the
Immune System, Cambridge Univ. Press, London — New York.
Lefkovits 1., Waldman H. (1984). Limiting dilution analysis of cells of the
immune system. I: The Clonal basis of the immune response, Immunol.
Today, 5, 265—268.
Zauderer M. (1984). In: Handbook of Experimental Immunology (D. Weir,
C. Blackwell, L. A. Herzenberg, L. A. Herzenberg, eds.), 4th ed. Blackwell, Oxford.
Глава 22
Получение лимфоидных химер птиц
В. Т. Вебер
I. ВВЕДЕНИЕ
Для иммунологических исследований на клеточном уровне важно уметь четко идентифицировать популяции Т- и В-лимфоцитов. Анатомическая и функциональная разобщенность тимуса и фабрициевой сумки у кур позволяет проводить уникальные экспериментальные манипуляции, которые могут быть использованы для получения Т/В-клеточных химер. Цель этих экспериментов состоит в том, чтобы получить животное, у которого иммунная система функционирует нормально, но Т- и В-клетки несут различные маркерные половые хромосомы, легко распознаваемые в препаратах делящихся клеток. Использование некоторых инбредных линий позволяет ввести в эту систему дополнительные маркеры, так как В-клетки донора можно отличить от клеток хозяина по аллоантигенам клеточной поверхности лимфоцитов либо с помощью аллоантисывороток, либо с помощью моноклональных антител. Совершенно очевидно, что использование недавно полученных моноклональных антител к субпопуляциям Т-клеток (Traill et al., 1984) и к клеткам гемопоэтической системы (Chen et al., 1984) в сочетании с упомянутыми химерами может еще более расширить возможности этой и без того весьма ценной модели для изучения онтогенеза и функционирования лимфоидной и гемопоэтической систем птиц.
II. ПРИНЦИП МЕТОДА
Чтобы получить Т/В-клеточные химеры, сначала необходимо уничтожить В-клеточную систему хозяина. Для этого только что вылупившимся цыплятам многократно инъецируют цикло-фосфамид, что приводит к гибели В-клеток, дифференцирующихся в фабрициевой сумке (однако её эпителиальная строма остается интактной), и к уничтожению тех немногочисленных В-клеток, которые уже успели заселить периферические лимфоидные органы (Lerman, Weidanz, 1970). Затем в организм реципиента, лишенный В-клеток, переносят гистосовместимые
412 Глава 22
клетки фабрициевой сумки, взятые у донора противоположного пола (т. е. маркированные половыми хромосомами). Перенесенные клетки эффективно заселяют фабрициевую сумку реципиента, в результате чего образуются Т/В-клеточные химеры с нормально функционирующей иммунной системой (Toivanen, Toivanen, 1973; Weber, 1973).
III. ДЕТАЛИ МЕТОДИКИ
А. Генетические линии
Для создания Т/В-клеточных химер, содержащих Т- и В-лим-фоциты с различными хромосомными маркерами, может быть использована любая из инбредных генетических линий (Weber, 1975). Для получения химер, в которых В-клетки можно распознать с помощью дополнительных маркеров [например, моноклональных антител (L-22) к аллоантигенам клеточной поверхности], используются две сублинии частично инбредной линии кур Н.В21, гомозиготные по главному комплексу гистосовместимости (МНС). Эти сублинии — Н.В21Ви-1а+ и Н.В21Ви-1а~ (сокращенно Ви+ и Ви~) — можно различать по присутствию или отсутствию аллоантигена Ви-1а на поверхности соответствующих лимфоцитов (Pink, Rijnbeek, 1983). Предварительные данные указывают на то, что В-клеточный аллоантиген, распознаваемый моноклональными антителами L-22, присутствует на поверхности В-лимфоцитов кур линии RPRL63 и не обнаруживается на В-лимфоцитах линии RPRL72. Таким образом, две эти линии являются еще одной потенциальной комбинацией гистосовместимых доноров и реципиентов.
