Иммунологические методы исследований - Лефковитса И.
ISBN 5-03-0011-70-6
Скачать (прямая ссылка):
лялись к подложке и обладали цитолитической активностью. Несмотря на то что обнаруженный CS-вариант размножился в присутствии антисыворотки к ФРТК-рецеп-тору и не имел заметного количества этого рецептора на поверхности клеток, нельзя исключить возможность того, что эти клетки синтезируют эндогенный ФРТК и реагируют на него. Мы провели повторную гибридизацию тиогуа-нинустойчивого (ГГФРТ-)-клона, полученного из описанного выше цитолитического С5~-клона, с клонами ЦТЛ третьего типа. От этого скрещивания мы получили гибриды, которые проявляли цитолитическую активность, сохраняющую специфичности обоих родителей, и которые, подобно родительскому клону ЦТЛ третьего типа, являлись ФРТК-зависимыми. Все CS--варианты, селекционированные из этих гибридов, сохраняли специфическую цитолитическую активность. Эти наблюдения проиллюстрированы на рис. 17-3.
2. Т-клеточные гибридомы с индуцируемой цитолитической активностью
Гибриды мышиных ЦТЛ с клетками тимомы крыс отличаются от гибридов, которые образуются при слиянии мышиных ЦТЛ с клетками тимомы мышей (Conzelmann et al., 1982b; Silva et al., 1983). Большинство (если не все)
Цитолитические Т-клеточные клоны и гибридомы
299
гибридов мышиных ЦТЛ с клетками крысиной тимомы могут расти в среде, не содержащей ФРТК. Когда эти клетки растут в среде без ФРТК, они не проявляют цитолитической активности, однако она индуцируется в результате кратковременного культивирования в CS-среде. Специфичность индуцируемых клеток неизвестна, так как они лизируют опухолевые клетки Р815, но не проявляют активности по отношению к клеткам мышей DBA/2, индуцированным ЛПС. Для индукции цитолитической активности необходим как ФРТК, так и другие пока еще не идентифицированные факторы. Индуцируемые гибриды получены при гибридизации клеток крысиной тимомы с мышиными клонами ЦТЛ второго или третьего типов (Silva et al., 1983).
3. Выработка интерферона цитолитическими гибридами и нецитолитическими вариантами
Все цитолитические гибриды, тестированные к настоящему времени на секрецию гамма-интерферона (у-ИФ), оказались его продуцентами. Небольшие количества у-ИФ конститутивно сек-ретируют как цитолитические С5_-варианты, описанные В разд. IV, В, 1, так и цитолитические С5+-гибриды, растущие в постоянных культурах в течение нескольких месяцев. Высокие концентрации у-ИФ обнаружены в культуральной среде всех гибридов, инкубированных в течение 24 ч в присутствии 10 мкг/мл Кон-А или соответствующих клеток-стимуляторов (Haas, Kisielow, 1984). ИФ синтезируется также нецитолитическими С5_-вариантами, хотя уровень секреции у них ниже, чем у цитолитических гибридов. Продукция ИФ нецитолитическими гибридами в ответ на антиген указывает на то, что отсутствие цитолитической активности не обусловлено утратой рецептора для антигена. Таким образом, СЭ^-варианты являются удобным источником материала для исследования антигенных рецепторов на молекулярном уровне.
Литература
Baker R. М., Brunette D. М., Makovitz R., Thompson С. И., 'Whitmore С. F., Siminovitch L., Till J. Е. (1974). Cell, 1, 9.
Beezley В. В., Ruddle N. Н. (1982). J. Immunol. Methods, 52, 269.
Benjamin W. R., Steeg P. S., Farrar J. J. (1982). Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 79, 5379.
von Boehmer H. (1974). J. Immunol., 112, 70. von Boehmer H., Haas W. (1984). Immunol. Rev., 54, 27. von Boehmer H., Turton K. (1983). Eur. J. Immunol., 13, 176. von Boehmer H., Kisielow P., Leiserson W., Haas W. (1984). J. Immunol., 133 59
Cantrell D. A., Smith K. A. (1983). J. Exp. Med., 158, 1895.
Choy W. N., Gapalakrishnan Т. V., Littlefield J. W. (1982). In: Technics in Somatic Cell Genetics (J. W. Shay, ed.), pp. 11—21, Plenum, New York.
300 Глава 17
Conzelmann A., Silva A., Cianfriglia М., Tougne Ch., Sekaly R. P., Nabholz M. (1982a). J. Exp. Med., 156, 1335.
Conzelmann A., Corthesy P., Cianfriglia М., Silva A., Nabholz M. (1982b). Nature (London), 298, 170.
Fogh J. (1973). In: Contamination in Tissue Culture (J. Fogh, ed.), p. 66, Academic Press, New York.
Fogh J., Fogh H. (1964). Proc. Soc. Exp. Biol. Med., 117, 899.
Galfre G., Howe S. C., Milstein C., Butcher G. W., Howard J. C. (1977). Nature (London), 266, 550.
Giles R. E., Ruddle F. H. (1973). Tissue Cult. Methods Appl., 475—495.
Haas W., Kisielow P. (1984). J. Immunol., in press.
Haas W., von Boehmer H. (1984). Eur. J. Immunol., in press.
Hiining R. Т., Bevan M. J. (1982). J. Exp. Med., 155, 111.
Johnson J. P., Cianfriglia М., Glasebrook A. /.., Nabholz M. (1982). In: Isolation, Characterization and Utilization of T Lymphocyte Clones (C. G. Fathman, F. W. Fitch, eds.) Academic Press, New York.
Kaufmann Y., Berke G., Eshhar Z. (1981). Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 78, 2502.
Kaufmann Y., Goldstein P., Pierres М., Springer T. A., Eshhar Z. (1982a). Nature (London), 300, 357.
Kaufmann Y., Berke G., Eshhar Z. (1982b). Lymphokines, 5, 277—289.
Kohler G., Lefkoaiis B., Coutinho A. (1977). Eur. J. Immunol., 7, 758.
Lefrancois L., Klein J. R., Paetkau V., Bevan M. J. (1984). J. Immunol., 132, 1845.
