Феромоны насекомых - Лебедева К.В.
Скачать (прямая ссылка):
Возможность выделить экстракт феромона с минимальным количеством балластных веществ увеличивается, если вместо кончиков брюшка насекомых использовать отпрепарированную железу, вырабатывающую феро-
15
мон, или яйцеклад насекомого [97, 173, 174]. Непродолжительное выдер живание (1-2 сек) железы или яйцеклада в подходящем растворителе позволяет получить экстракт феромона, практически не нуждающийся в дополнительной очистке перед анализом ГЖХ или ГЖХ-МС [130, 143, 157, 176, 177]. Такой способ выделения становится eze более популярным в последнее время, так как дает возможность ограничиться небольшим количеством особей [30, 84, 150, 182]. С другой стороны, этот метод стал возможен только в результате совершенствования техники инструментального микроанализа, позволяющей идентифицировать нанограм-мовые количества веществ и тем самым ограничиваться иногда одной— двумя особями [31]. Например, оказалось, что для идентификации четырех компонентов феромона Н. zea достаточно приготовить раствор 20 желез в 60 мкл гептана [144]. При хорошо разрешающей капиллярной колонке хромасса достаточно использовать экстракт одного яйцеклада в 3 мкл гептана [145]. «
При выделении феромонов из желез особое внимание должно быть уделено качеству используемого материала, строгому соблюдению условий его хранения или транспортировки. Так, например, личинок Pseu-daletia unipuncta собирали в поле и держали в камерах при 21° и фотопериоде 14 ч свет и 10 ч темнота. Самок шести-, семидневного возраста через 5—6 ч скотофазы помещали в холодильник (+5° С) на 10—16 мин. Замороженную железу выдавливали и отсекали от восьмого сегмента. С железы соскабливали жиры и помещали на 1 ч в хлористый метилен [146].
Железы самки совки Т. ni помещали на 1—2 сек в серный эфир (200 мкл), экстракт сушили MgS04 и доводили до 3—5 мкл, упаривая струей сухого азота [163]. Экстракт от одной железы Т. ni получали вымачиванием ее в течение 24 ч в сероуглероде. При таком способе экстракции удается собрать до 812 нг/особь/ночь [68].
Перед отрезанием яйцекладов двух-трехдневных самок Н. armigera после 5—8 ч. скотофазы их выдерживали 12 ч на свету при 25° С и 70%-ной влажности, затем 12 ч в темноте при 20° С и 80%-ной влажности; яйцеклады хранили в сероуглероде [182].
Другие способы выделения феромонов
Менее популярным способом выделения феромонов представляется их экстракция из марли [185] или из фильтровальной бумаги [8, 33, 65, 183, 186], в контакте с которыми в специальных сосудах находятся насекомые в условиях лаборатории. Для этих целей насекомых разных партий выдерживают в течение нескольких дней на одних и тех же мате -риалах
Применение такого способа, например, для выделения феромона самки листовертки С. fumiferana позволило успешно идентифицировать основные компоненты в виде Е (96%) - и Z (4%) -изомеров 11TDAL. Для этого марлю после 3000 самок-ночей смывали 1700 мл гексана, фильтровали, сушили Na2S04 и упаривали при комнатной температуре до 100 мкл. Для анализа ГЖХ отбирали пробу в 0,3 мкл [185]. Аналогично обрабатывали марлю после 12 тыс. самок-ночей этого вида [55].
Для сбора феромона с фильтровальной бумаги девственных самок содержат в закрытых сосудах с листами фильтровальной бумаги; затем фильтровальную бумагу экстрагируют, например, хлористым метиленом, сушат Na2S04, концентрируют на роторном испарителе при температуре ниже 40° С и хранят при —20° С [186]. Или, например, отродившихся са-
16
мок Н. zea помещают в садки со стороной куба 30 см по 200—300 штук в каждый садок. На дне садка помещают полосы фильтровальной бумаги (5 см X 30 см), промытые эфиром. Через 2 дня бумагу экстрагируют эфи ром в аппарате Сокслета, раствор концентрируют и хранят при —20 С [8].
В пластиковом (9 см X 15 см) или стеклянном контейнере (3 см X 20 см) с листами фильтровальной бумаги (900 см: в пластиковом и 100 см2 в стеклянном) выдерживали в течение трех дней 50 самок Plutella maculipen-nis при комнатной температуре. В общей сложности получен экстракт фильтровальной бумаги от 21 тыс. самок P. maculipennis. Очистка экстракта колоночной хроматографией на флоризиле позволила получить активную фракцию при элюировании смесью 5% эфира в гексане. Хроматография этой фракции на колонке с 16,7% AgN03, последующая очистка ГЖХ и биотестирование с помощью электроантеннографии (ЭАГ) позволили выделить два вещества (Z11HDAL и Z11HDA) [183].
Оригинальным методом npeflcTaerf ется сбор феромона, адсорбировавшегося на стенках стеклянного сосуда, в котором хранятся самки в лабораторных условиях [46, 119, 187, 188]. Для этого, например, в стеклянном сосуде на 4 л самок (по 50 штук в каждом сосуде) выдерживают в течение трех дней. Затем сосуды вымывают пентаном, фильтруют. Фильтрат сушат и сохраняют [119]. Сбор феромона со стенок сосуда был использован для установления количества феромона, которое испускает самка P. interpunctella за 1 ч в период своей активности в зависимости от возраста и времени суток. Для этого самок помещали в стеклянный сосуд на 500 мл на 1 ч при 25° С и ждали позы зова. После этого быстро извлекали насекомых из сосуда и ополаскивали его 5—6 мл эфира. Каждый смыв фильровали, концентрировали под азотом до 3—5 мкл при 30° С и хроматографировали на стеклянной колонке (1,8 м X 2 мм) с 5% Карбо-вакса 20М на Хромосорбе W (100—120 меш) при 180°С и OV-1 с использованием внутреннего стандарта (Z7HDA), с помощью которого определяли также процент потерь [71 ].
