Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Лебедева К.В. -> "Феромоны насекомых" -> 8

Феромоны насекомых - Лебедева К.В.

Лебедева К.В., Миняйло В.А., Пятнова Ю.Б. Феромоны насекомых — М.: Наука, 1984. — 269 c.
Скачать (прямая ссылка): feromoninasekomih1984.djv
Предыдущая << 1 .. 2 3 4 5 6 7 < 8 > 9 10 11 12 13 14 .. 150 >> Следующая

Для экстракции феромона применяются такие растворители, которые улетучиваются быстрее феромона, или такие, которые не мешают дальнейшему анализу феромона. Если феромон неполярен, то для его экстракции удобно использовать такие растворители, как гексан, гептан, бензол, хлористый метилен, эфир. Для экстракции спиртовой компоненты необходим более полярный растворитель. Самый популярный растворитель, используемый для экстракции, — хлористый метилен [6, 10, 20, 51, 53,58,90,103,105,106, 116—121, 123—129], менее популярны—эфир [130— 133, 135, 137], гексан [9, 46, 82, 95, 140-142], гептан [9, 144-146, 148], бензол [109, 148—159], дихлорэтан [91, 151] и смесь растворителей [6, 152].
Главное условие к растворителю —чистота. Очищенный и перегнанный растворитель перед употреблением пропускают через хроматографическую колонку с нейтральной [54, 153, 154] или щелочной [17] окисью алюминия.
Несмотря на то что большинство исследователей для вымачивания кончика брюшка или целого насекомого используют хлористый метилен, обращают на себя внимание некоторые специальные работы, в которых сообщают о значительно большей активности экстрактов гексаном, чем хлористым метиленом или другими растворителями [136]. Гексановый экстракт кончиков брюшка самок Orgyia leucostigma был в 60 раз активнее экстракта хлористым метиленом [139]. Однако отмечено также, что при высушивании экстракта Na2S04 наибольшие потери феромона наблюдаются при экстракции феромона гексаном [155].
Количество растворителя, которое достаточно для экстракции, исчисляется 3—20 мкл/особь [157—159] в зависимости от времени выдерживания. Если анализ экстракта проводится моментально, то достаточно минималь ной дозы растворителя. В противном случае количество растворителя долж но быть увеличено.
14
Достаточно важна также продолжительность вымачивания кончика брюшка в растворителе. Такую экстракцию можно проводить в течение нескольких минут (15—20 мин) [53, 54, 119, 120, 160], часов [58, 110, 154] или суток [161] .у Понятно, что при меньшем периоде вымачивания будет меньшее количество феромона, но и меньшее количество балластных веществ. У девственных самок совок Earias insulana отрезали кончики брюшка на третьем часу скотофазы второй ночи после отрождения. Отсеченные кончики брюшка экстрагировали эфиром или гексаном 15 мин при комнатной температуре, экстракты отфильтровывали, упаривали и концентрировали для анализа [82]. Кончики брюшек девственных самок Н. armigera отрезали на седьмом часу темнового периода и погружали в гексан на 5—10 мин; после фильтрования экстракт концентрировали на роторном испарителе, добавляли несколько капель гептана, а гексан удаляли под азотом [9]. А, например, кончики брюшка Platynottf f laveda-па погружали в перегнанный хлористый метилен на 24 ч при —5 С [162] ; кончики брюшка двух—трехдевных самок М. oleracia выдерживали трое-пять суток в хлористом метилене при 10—15° С (100 самок в 10 мл)
[161].
Чтобы исключить переход балластных веществ в экстракт, вместо вымачивания кончик брюшка ополаскивают растворителем, как это было проделано с самками С. semiferana [22], Euxoa ochrogaster [12], Oryia leucos-tigma [139], H. virescens [164], Amyelois transitella [130], T. ni [163]. Вытянутые в момент зова кончики брюшка у самки совки М. brassicae полоскали в хлористом метилене так, чтобы в экстракт переходило минимальное количество липидов. Смывки феромона считались активными, если самцы реагировали на 0,1 самки-эквивалента [226].
В других случаях, наоборот, два последних сегмента брюшка насекомого гомогенизируют в растворителе с последующей экстракцией в аппарате Сокслета [43, 63, 64, 118] или перетирают с сульфатом натрия (или магния), одновременно высушивая экстракт [104, 132, 135, 166, 167].
Для удобства экстракции насекомых иногда предварительно замораживают при —10° С [139, 169] или при —20° С [53, 168] в течение 10 мин или погружают в жидкий азот [102]. Вместо вымораживания самок иногда анестезируют перед тем, как отсекать кончики брюшка в растворитель [5,170]. Так как экстракт феромона может потерять свою активность при хранении при комнатной температуре уже в течение трех недель [123], сырые экстракты хранят в атмосфере азота, в темноте, при 0 — (+7) С [64, 150] или при -25° С [35, 130, 154, 171].
Перед сбором феромона от нескольких тысяч самок кукурузного мотылька О. nubilalis отродившихся насекомых помещали в сетки (56 см X X 28 см X 45,8 см) и два дня выдерживали в цикле фотофазы—скотофазы (16 ч при 27° С — 8 ч при 20° С). Затем самок охлаждали и кончики их брюшка отрезали в эфир. Эфирный экстракт хранили при 0 С, пока не собрали 24 тыс. кончиков брюшка в 80 мл эфира. Затем проводили гомогенизацию при 20° С порциями в 3 тыс. брюшек в 30 мл эфира четырехкратно. Профильтрованный экстракт сушили Na2S04 и растворитель упаривали на роторном испарителе при атмосферном давлении [64].
Иногда кончики брюшка мацерируют и фильтруют через целит на стеклянную крошку; остаток промывают хлористым метиленом и концентрируют до 25 самок/мл; экстракт хранят под азотом при —25 С [111].
Предыдущая << 1 .. 2 3 4 5 6 7 < 8 > 9 10 11 12 13 14 .. 150 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed