Феромоны насекомых - Лебедева К.В.
Скачать (прямая ссылка):
Непосредственно леред употреблением трубочку с Порапаком Q прогревают в токе азота (3 л/мин) 24 ч при 180РС и 24 ч при 110° [78] или продувают сухим азотом при 200 в хроматографе [68]. Скорость воздуха при сборе феромона 0,5—2 л/мин [53, 58, 66, 68, 86]. Летучие вещества с Порапака Q можно экстрагировать подходящим растворителем в аппарате Сокслета [66, 78]. Например. 20—50 самок Argyrotaenia citrina (1—4-дневного возраста) помещали в стеклянную трубку (9 см х 1,2), заткнутую стеклянной ватой, и феромон собирали на Порапак Q (20 см в колонке 45см х 2,2см). Сбор феромона провалили при скорости воздуха 2 л/мин, 16°С и смена света и темноты 16:8. Воздушный экстракт с Порапака Q элюировали Skeilysoive В [28, 86]. Или, например, самок совок Т. ni (смена света и темноты 14:10) помещали в стеклянные цилиндры (85мм х50мм), покрытые крышкой с сеткой, на которую крепился кусочек ваты, смоченный 10%-ным раствором сахара. Воздух пропускали через цилиндр с контролируемой скоростью 2,15—2,25 л/мин (1,9 м/сек) и летучие вещества собирали в стеклянную трубку мм х 100мм) со 100 мг Порапака Q (80—100 меш). Сбор веществ проводили подключением ваку-
12
ума к трубке с Порапаком Q, подставляя ее к выставленному кончику брюшка самки в момент зова на расстоянии 1 мм. В конце скотофазы содержимое трубки экстрагировали сероуглеродом [68]. Обычно используют трубки диаметром около 2 см, произвольной длины, где столбик Порапака Q составляет 20 см ( 25 г); при этом кончики трубки сужены до 0,6 см. При сборе малых'количеств феромона пользуются трубочками меньших размеров (6ммх50мм). После аэрирования насекомых в течение двух дней Порапак Q экстрагируют пентаном в аппарате Сокслета в течение 24 ч. Концентрирование экстракта проводят отгонкой пентана через колонку (25смх1 см), заполненную стеклянными шариками [78].
Количество феромона, которое при этом удается собрать, зависит и от его содержания в самке и от выбранной техники сбора. Например, если при сборе на Порапак Q летучих веществ самки Т. ni удается проэк-страгировать около 100 нг/особь/5 мин [68], то при сборе из воздуха феромона В. mori в охлаждаемые ловушки экстрагируется 15нг бомби-каля и 164 нг бомби кола/особь [83], а при пропускании воздуха через камеру (30см х 6,5см) с 50 самками огневки С. topiara, сборе летучих веществ на Порапак Q и их вымывании хлористым метиленом удается извлечь только 0,5 нг/особь за 1200 ч. По опыту с модельными соединениями хлористый метилен вымывает с Порапака Q только 40% смеси Z11HDAL и Z11HDOL [58].
Оригинальным способом сбора летучих веществ представляется сбор феромона в момент зова с насекомых, помещенных в хроматографическую колонку (с/=4 см) на 1—2 мин с последующим элюированием содержимого эфиром [74]. Удачным методом сбора летучих веществ представляется их сбор в ловушки с органическим растворителем [28].
На примере выделения феромона яблонной плодожорки можно убедиться в том, что сбор феромонов из воздуха намного эффективнее других методов выделения. Попытки выделить и идентифицировать феромон экстракцией целых насекомых, начатые еще в 1966 г., кончились неудачей, и только в 1972 г. впервые удалось обнаружить семь компонентов феромона в воздушном экстракте 500 самок 2—4-дневного возраста L. рото-nella, собирая в хлористый метилен (150 мл) летучие вещества при 24° С. Раствор упарили до 1 мл и хроматографировали ГЖХна колонке с Апиезо-ном L при различных температурах [88]. В воздушном экстракте самок О. nubilalis, у которых до 1980 г. были найдены только два компонента феромона (Z11TDA и E11TDA), в 1980 г. нашли четыре активных компонента [89].
Выделение феромона экстракцией различных частей тела насекомого
Методом экстракции органическим растворителем целого насекомого [90, 91, 93, 95] или отдельных его частей [97, 98] можно извлечь гораздо большее количество феромона, но вместе с тем и большее количество балластных веществ, из которых в свою очередь приходится извлекать вкрапления компонентов феромона. Перед началом процесса экстракции выясняют, какая часть тела насекомого может быть источником феромона. При изучении экстрактов различных частей тела самки и особей обоего пола бабочки Pectinophora gossypiella установили, что активны только кончики брюшка самок в хлористом метилене [99, 100]. Для выделения феромона и особенно для подбора условий выделения экстракцией органическими растворителями количество биоматериала, необходимого для этих целей, определяется содержанием феромона в особи исследуемого вида. Так
13
как это количество колеблется от сотых долей нг до нескольких десятков нг на особь [53,101 —104], то и количество исходного биоматериала колеб-лебся от десятков особей до сотен тысяч [6, 11, 20, 74, 91, 101 103 105, 107,109,110].
В свою очередь количество феромона колеблется в зависимости от возраста исследуемой особи, продолжительности ее фото- и скотофазы, а также условий влажности и температуры, в которых эта особь содержится.
Так, самка Plod ia interpunctella, выделяющая за 1 ч 3 нг Z9E12TDDA и 6 нг Z9E12TDDOL, во время темновой фазы выделяла на 1,0—1,5 нг больше, чем во время световой фазы, а у самок старше пяти дней снижалось выделение феромона до 0,5 нг [71]. Если перед экстракцией кончиков брюшка самок Diparopsis castanea хлористым метиленом выдержать живых насекомых в течение четырех часов в темноте, то количество феромона увеличивается в 30—50 раз [111]. Так как совка S. segetum испускает феромон в первой половине скотофазы (насекомых выдерживают 18 ч на свету и 6 ч в темноте), то самок анестезируют в первой половине скотофазы и кончики брюшка погружают в гексан. Хранят экстракт при —20° (±3°С) J66]. Бабочек Н. virescens выращивали в условиях 16 ч фотофазы и 25 С; кончики брюшка самок 0,5—4-дневного возраста отрезали в хлористый метилен в интервале от 3,5 до 5 ч скотофазы [112]. А у 4-дневных самок Mamestra configurata, выдержанных в условиях 14-часового освещения, отсекали кончики брюшка на пятом—шестом часу скотофазы в хлористый метилен, который концентрировали и хранили при-20° С [114].
