Феромоны насекомых - Лебедева К.В.
Скачать (прямая ссылка):
Восстановлением алюмогидридом лития пользуются иногда при реаци-лировании. Так, под действием алюмогидрида лития ацетатная фракция (в растворе эфира) превращается в спиртовую. Через 1 ч добавляют несколько капель этанола, а затем несколько капель воды. Эфирный слой декантируют и сушат MgS04, ацетилируют несколькими каплями ацетил-хлорида, избыток которого упаривают азотом после стояния в течение 0,5 ч [105].
Присутствие альдегидной или кетонной группы подтверждается потерей активности под действием ДНФГ [55, 58, 125, 132, 144] в растворе уксусной кислоты. Присутствие альдегидов в экстракте желез Н. zea определяли добавлением к 30 мкл экстракта пяти самок-эквивалентов 0,25 мг ДНФГ и 5 см3 НСI (газ). Затыкали пробкой и оставляли на 2 ч при 22 С. Реакционную смесь концентрировали азотом до 10 мкл [144]. Наличие кетонной группы в компоненте феромона О. pseudotsugata было доказано потерей активности при реакции с ДНФГ [125]. Наличие альдегидной группы может быть также проверено реакцией с бисульфитом. Для этого к сконцентрированному экстракту феромона добавляют насыщенный водный раствор метабисульфита натрия и встряхивают 30 мин. Водный раствор промывают хлористым метиленом и добавляют твердый Na2C03 для регенерации альдегидного материала [132].
Микроаналитическая техника идентификации
Спектральные исследования с помощью ЯМР, Уф и ИК-спектрометрии требуют значительно больших количеств вещества, чем это возможно извлечь из насекомых (нанограммы). Поэтому основную информацию
о структуре компонентов феромона можно получить с помощью масс-спектрометрии, в частности хроматомасс-спектрометрии (ГЖХ —МС). Однако так как этого не всегда бывает достаточно, полезно использовать приемы микроаналитической техники, связанной с функциональным анализом в колонке газового хроматографа — реакционной ГЖХ (РГЖХ), а также с микроозонолизом, микроэпоксидированием. Достоинства этих методов в том, что они могут быть использованы для анализа менее чем микрограммовых количеств веществ и в течение нескольких минут.
Реакционная газо-жидкостная хроматография (РГЖХ)
ГЖХ с пламенно-ионизационным детектором (ПИД) способна детектировать малые количества соединений даже в очень сложных смесях. Использование РГЖХ позволяет проводить некоторые реакции, такие как пиролиз, гидрогенизация, гидрогенолиз, дегидрогенизация и определение
35
углеродного скелета непосредственно в колонке хроматографа [233]. Непосредственно в колонке хроматографа можно провести анализ на некоторые функциональные группы с образованием летучих соединений, которые могут быть обнаружены по времени удерживания, отпичному от времени удерживания исходного соединения.
В случае образования нелетучего соединения информацией является исчезновение пика исходного соединения на хроматограмме, свидетельствующее о том, что функциональная группа в этом исходном соединении прореагировала. Исчезновение пика принято называть "вычитанием". Вычитать можно спирты борной кислотой [234, 235], альдегиды—стационарной фазой FFAP [236], альдегиды вместе с кетонами—гидроксила-мином [237] и карбоновые кислоты—окисью цинка [238]. Для количественного вычитания альдегидов пользуются О-дианизидином, а для количественного вычитания кетонов, альдегидов и эпокисей пользуются бен-зидином. Для исключения из их состава эпокисей применяют фосфорную кислоту. Для этого реагент вместо фазы наносится на адсорбент, помещенный в петлеобразную трубочку диаметров, равным диаметру газовой колонки хроматографа, которая присоединяется к началу или концу этой колонки. Продукт реакции детектируется в процессе ГЖХ-анапиза.
Гидрогенизация проводится на входе в колонку газового хроматографа с использованием водорода в качестве газа-носителя. Катализатор помещается в колонку, занимает 0,6 см длины в начале колонки и готовится нанесением, например 1%-ного палладия, на нейтральную хроматографическую подложку [233]. При этом катализатор помещается между колонкой и инжектором, если температура в ней в пределах 150—200° С; если температура за пределами этого интервала, катализатор помещают внутрь инжектора и выдерживают при требуемой температуре. Этим способом легко восстанавливается двойная связь в спиртах, кетонах, простых и сложных эфирах. Хотя частичный гидрогенолиз возможен при гидрировании некоторых соединений, например альдегидов, это не мешает определению структуры, хотя и влияет на количественное определение, так как продукты гидрогенолиза выходят много раньше, чем продукты гидрогенизации. Большим облегчением в гидрогенизации является помещение гидрогена-тора между колонкой и масс-спектрометром. Сравнение молекулярных ионов гидрированного продукта и негидрированного позволяет определить количество двойных связей в молекуле. Так как Z- и Е-изомеры превращаются в одно и то же соединение, эта процедура облегчает их идентификацию. Гидрогенизация облегчает интерпретацию масс-спектра. Так, например, без гидрогенизации невозможно определить место разветвления в молекуле [199]. Этим методом было установлено, что феромон хлопковой моли P. gossypiella не содержит ответвления [239].
