Феромоны насекомых - Лебедева К.В.
Скачать (прямая ссылка):
Изменчивость ЭАГ, обусловленная внутренним состоянием насекомого. ЭАГ зависит от возраста насекомого. Способность антенн давать ЭАГ в ответ на механическое и химическое раздражение возникает иногда еще за несколько дней до выхода имаго из куколки, как это показано у бражника Manduca sexta [204]. Первыми у зтого вида появлялись ответы на механические раздражители, затем на E2HAL и, наконец, на экстракт феромона. При зтом не было отмечено соответствующей разницы в морфологическом развитии разных сенсилл, все они развивались синхронно. У совки Trichoplusia ni антенны также отвечали на феромон еще до выхода самцов из куколок. У имаго зтого вида вплоть до 3,5 суток после выхода из куколки ЭАГ-ответы оставались неизменными [139]. У яблонной плодожорки Laspeyresia pomonella максимум амплитуды ЭАГ на феромон достигается по истечении одних суток после выхода самца из куколки, затем ответы сохраняются на постоянном уровне по крайней мере до восьми суток [205]. Подобное изменение амплитуды ЭАГ с возрастом отмечено также у короеда Ips typographus и у пчелы Apis mellifica. При этом ход нарастания чувствительности к разным веществам может быть
223
неодинаковым [206]. Снижение ЭА Г-ответов с возрастом наблюдали у листовертки Argyrotaenia velutinana [181]. У самцов и самок совки Pseu-daletia unipuncta ЭАГ-ответы на компоненты феромона самцов достигают максимума на третий день, а затем уменьшаются [207].
Не все антенны реагируют на химические вещества. -При зтом антенны разных особей могут отвечать или не отвечать на один и тот же раздражитель. Это отмечено у пчел, короедов и тараканов [135, 206, 208]. Амплитуда ЭАГ у разных особей имеет большой индивидуальный разброс (например, [206]). Причины и механизмы всех этих явлений почти не изучены. Предполагают, что изменение ЭАГ с возрастом связаны с первоначальным увеличением, а затем с уменьшением числа реагирующих акцепторов на рецепторных мембранах [207]. Допускается возможность гормонального [124, 206] или нервного [206] управления функционированием рецепторов, в частности их чувствительностью. Отмечено изменение амплитуды ЭАГ у самок и самцов листовертки Chor istoneuга fumiferana при действии аналога ювенильного гормона альтозида [209].
Влияние факторов среды на ЭАГ. На ЭАГ влияет температура. Бабочки плодожорки Laspeyresia pomonella реагируют на феромон электрофизиологически между 5—32° С, оптимальные температуры 15—26° С [210]. У мухи Lucilia sericata амплитуда ЭАГ с понижением температуры до 6°С растет [138]. Освещенность не влияет на амплитуду ЭАГ [139]. Имеются данные о существовании суточного ритма изменения чувствительности у яблонной плодожорки [210], а также огневки Diatraea grandiosella [211], причем по зтим данным ответы в разные часы отличаются весьма существенно. Однако у совки Trichoplusia ni влияния времени суток на амплитуду ЭАГ не зарегистрировано [139]. Учитывая массовое использование метода ЭАГ и отсутствие других сообщений о роли суточного ритма, можно предположить, что это явление по крайней мере мало существенно с точки зрения Э А Г-тестов.
Техника метода ЭАГ
Описано много вариантов техники метода ЭАГ. Все они отличаются только незначительными деталями в методах отведения электрического сигнала от антенны, в системах подачи раздражителя и способах регистрации сигнала.
Отведение сигнала от антенны.: ЭАГ регистрируется как от антенны живого насекомого [139, 195, 212, 213], так и от отрезанной антенны [7, 214]. В целом оба способа являются эффективными. Использование живых насекомых позволяет отводить ЭАГ в течение многих часов и даже суток [195], а ампутированных антенн — несколько часов.
Иногда высказывается мнение [215, 216], будто ЭАГ во многих случаях является артефактом и может быть получена на прокипяченных антеннах, от куска ваты, смоченного физиологическим раствором, и т.д. В принципе сигнал, подобный ЭАГ, действительно может быть получен даже от куска ваты, но исследователи, которые широко используют метод ЭАГ, не отмечают каких-либо затруднений из-за артефактов (например, [7]).
Отведение от живого насекомого более сложно технически. Приходится' закреплять само насекомое, а также антенну. У насекомых часто отрезают крылья и закрепляют туловище с помощью клейкой ленты. Чтобы насекомые оставались живыми длительное время, брюшко не закрепляют, и насекомые могут совершать дыхательные движения [195]. Иногда для иммобилизации насекомое помещают в трубку, так чтобы голова была вровень с ее краем [139, 217]. Антенну у крупных насекомых прикалывают
224
к пробке с помощью проволочных крючков [133, 195]. Иногда антенна удерживается в нужном положении просто с помощью электрода, вставленного в отрезанный конец антенны [139], укрепляется на клейкой ленте [217] или другими способами.
Для использования ампутированной антенны ее отрезают вблизи головы или вместе с головой. Последний вариант применяют при работе с мелкими насекомыми, при зтом ненужную антенну отрезают [7]. Проксимальным концом антенну прикрепляют вертикально к куску влажного воска на часовом стекле и наливают в него раствор соли, чтобы он контактировал с концом антенны. К другому концу антенны подводят пипетку, заполненную тем же раствором, обеспечивая контакт жидкости с гемолимфой [7]. Иногда концы антенны помещают в две пипетки или трубки или, наоборот, микрокапилляры вводят в концы антенны, антенна удерживается между ними в подвешенном состоянии [206]. Можно также помещать антенну между двумя углублениями в парафине или другом несма-чиваемом водой изоляционном материале, заполненными раствором соли (концы антенн контактируют с раствором соли в одном и другом углублениях) [214].
