Феромоны насекомых - Лебедева К.В.
Скачать (прямая ссылка):
20
Колонку с силикагелем при элюировании петролейным эфиром с увеличивающимся количеством серного эфира использовали для очистки сырых экстрактов Coseyra cephalonica [204] nSitotroga cerealella [135]. Для более тонкого препаративного выделения активной фракции потребовалась последующая кодистилляция, а за ней — препаративная ГЖХ, чтобы можно было идентифицировать основной компонент как Z7E11HDDA [206].
Элюируя раствором постепенно увеличивающейся концентрации серного эфира в гексане, удалось так отделить на силикагеле феромон яблонной плодожорки L. pomonella, что он мог быть непосредственно идентифицирован ГЖХ - МС как E8E10DDOL [200].
Раствором 5%-ного эфира в гексане были вымыты активные фракции сырого экстракта совок A. fucosa и Spodoptera litura, содержащие, как оказалось, ацетатные компоненты [186], а также Leucania loreyi [207] и Homona magnanima [120].
Нейтральная окись алюминия была удачно использована при выделении сырого экстракта плодожорки A. leucotreta элюированием смесями петро-лейный эфир — бензол, бензол — этипацетат, этилацетат — метанол. Перед ГЖХ—МС идентификацией достаточно было поделить активную фракцию в аргентированном тонком слое [166].
Задача препаративного выделения активной фракции значительно упрощается, если экстракт предварительно очищен вымораживанием [5, 6, 46, 132, 168], выделением в нейтральную фракцию [74] ипи получен с фильтра [184], на котором содержались насекомые, а лучше — из воздуха над живыми насекомыми [58,196].
Более тонкое разделение колоночной хроматографией активной фракции после ее препаративного выделения эффективно при смене адсорбента или элюирующей смеси. Для отделения предельных веществ от непредельных, а также непредельных друг от друга используют жидкостную хроматографию, с добавлением AgN03. Например, 100 г силикагеля смешивают с 20 г AgN03, растворяют в 100 мл воды и активируют 24 ч при 120 С. Смешивают пополам по весу с целитом-545 и упаковывают в колонку (с/ =75 мм) в пентане. Смесь веществ в количестве 200 мг может быть поделена на 10 г адсорбента Si02 — АдГЮз [117]. Например, после разделения сырого экстракта феромона листовертки A. fasciata на колонке с фло-ризилом деление активной фракции на колонке со смесью Si02 — AgN03 при градиентном элюировании эфира в петролейном эфире дает возможность выделить основные компоненты феромона (Z9TDA и Z11TDA) 3%-ным эфиром в петролейном эфире, а вторичные компоненты (E11TDA и 10MeDDA) — 10%-ным эфиром в петролейном эфире [74].
Основные компоненты феромона A. fasciata (Z9TDA и Z11TDA) и Prodenia eridania (Z9TDA и Z9E12TDDA) были выделены также делением активной фракции после колонок с флоризилом и силикагелем на колонке с Adsorbosil CABN элюированием по 100 мл каждого раствора: 0%, 5%, 15%, 50% эфира в петролейном эфире [90] или эфира в гексане [46]. Основной компонент совки S. frugiperda (Z9TDA) был выделен градиентным элюированием с колонки (Si02— AgN03) активной фракции, предварительно очищенной колоночной хроматографией на силикагеле, ТСХ на силикагеле и снова колоночной хроматографией [5]. Содержание в аргентированных колонках составляло 70—25%.
Очистка сырых экстрактов гель-проникающей хроматографией. Наиболее популярным способом очистки сырого экстракта можно считать г1ель-проникающую хроматографию, которая может быть использована дИя грубого разделения смесей веществ по их молекулярным весам. Деление экстракта по этому принципу позволяет выделить компоненты феро-
21
мона практически в одной фракции, так как они обладают близкими молекулярными весами, отличающимися не более чем на 100 молекулярных единиц, а это в свою очередь позволяет выделить феромонную смесь в полном ее составе, не расчленяя компоненты по разным фракциям, и тем самым позволяет сохранить их в том качественном и количественном соотношении, в каком они находились в экстракте и в котором они дают максимум биологической активности.
Для разделения веществ в соответствии с этой их разной способностью включения в поры адсорбента чаще всего применяется Сефадекс LH-20 или Порагель 60А.
Так, в объеме 125—145 мл с колонки (150 см х 0,7 см) с Сефадексом LH-20 были вымыты ацетоном со скоростью 20 мл/*1 активные фракции, содержащие компоненты феромонов листоверток A. orana (Z9TDA и Z11TDA) [20], A. podana (Z11TDA и E11TDA) [106], плодожорки Сгур-tophlebia leucotreta (Z8DDA и E8DDA) [118]. Компонент феромона бражника Manduca sexta (ЕЮ, Z12HDDAL) был вымыт из колонки с Сефадексом LH-20 смесью бензол — ацетон (1:1) [ 132]. А для вымывания ацетоном со скоростью 20 мл/ч компонентов феромона Phthorimaea operculella (E4Z7TrDDA и E4Z7Z10TrDTrA) использовали колонку с Сефадексом LH-20 (150 см х 1,4 см) [209].
Однако при всех достоинствах классической колоночной хроматографии необходимо отметить ее достаточную длительность. Вместе с тем этот недостаток с успехом преодолевается получившим в последние годы развитие методом, использующим тонко-дисперсные адсорбенты, элюирование под давлением и названным высокоразрешающей жидкостной хроматографией под давлением (HPLC).
