Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Лазуркина Ю.С. -> "Физические методы исследования белков и нуклеиновых кислот" -> 28

Физические методы исследования белков и нуклеиновых кислот - Лазуркина Ю.С.

Лазуркина Ю.С. Физические методы исследования белков и нуклеиновых кислот — Наука, 1967. — 343 c.
Скачать (прямая ссылка): fizmetodiisledovaniyabelkov1967.djvu
Предыдущая << 1 .. 22 23 24 25 26 27 < 28 > 29 30 31 32 33 34 .. 133 >> Следующая

Биологические объекты состоят из веществ с малым атомным номером — из водорода, углерода, азота, фосфора и т. д. Плотность для различных биологических объектов составляет от 1 до 2 г/см3. Минимальная толщина биологического объекта такой плотности, выявляемая при ускоряющем напряжении в электронном микроскопе 50 кв, равна примерно 50 А [11]. Практически неконтрастированные частицы небольших вирусов, расположенные на поддерживающей пленке, наблюдаются в электронном микроскопе в виде бесструктурных пятен, а отдельные неконтрастированные молекулы нуклеиновых кислот вообще не видны. Между тем задача современной электронной микроскопии в биологии состоит в том, чтобы по возможности глубже проникнуть в строение клетки и ее структурных компонентов, а также в строение вирусных частиц. В связи с этим биологические объекты приходится тем или иным способом контрастировать.
Наряду с контрастированием оттенением металлами и использованием широко распространенного метода реплик разработаны специфические методы контрастирования, применяемые главным образом в биологии. Широкое применение получил метод избирательного «окрашивания» тканей, тонких срезов и отдельных частиц и молекул солями тяжелых металлов, а также метод так называемого негативного контрастирования.
К специфическим особенностям электронной микроскопии в биологии относится также большая вероятность возникновения артефактов, т. е. внесенных в структуру объекта искажений его реальной формы. Это связано, с одной стороны, с процессом фиксации и высушивания, с другой — с процессом контрастирования. Для обнаружения артефактов и предотвращения их необходимы тщательный анализ полученного изображения и сравнение полученных данных с результатами других исследований.
б. Пленки-подложки для препаратов
Биологические макромолекулы для исследования их в электронном микроскопе размещаются на тончайших пленках-под-ложках. В свою очередь, опорой для этих пленок служат специальные сетки, изготовленные из меди электролитическим способом или сплетенные из тонкой проволоки. Те же электроны, которые формируют изображение исследуемых объектов, взаимодействуют и с пленкой-подложкой. Поэтому, если толщина пленки относительно велика или материал, из которого она изготовлена, сильно рассеивает электроны, контрастность изображения помещенного на ней объекта резко ухудшается. Материал пленки должен быть механически прочным, обладать хорошей теплопроводностью и стойкостью к электронной бомбардировке. Иногда препараты, расположенные на пленке-подложке, подвергаются специальной обработке. В этих случаях к пленке предъявляют дополнительные требования химической стойкости.
Следует отметить еще одну важную особенность пленок-подложек. При исследовании молекул биополимеров поддерживающая пленка в силу свойств своей поверхности (гидрофильность или гидрофобность, наличие заряда) может оказывать существенное влияние на их конфигурацию. Это необходимо учитывать при выборе подложки или трактовке результатов.
В практике электронномикроскопических исследований биологических макромолекул чаще всего используются коллодиевые и углеродные пленки. Формваровые и кварцевые пленки, одно время широко распространенные, употребляются редко. Некоторые свойства пленок-подложек приведены в табл. 1. В специальных случаях, например при исследовании молекул нуклеиновых кислот, используются подложки с особыми свойствами, о которых будет сказано в дальнейшем.
Таблица 1
Некоторые свойства пленок-подложек [12]
Пленка Прозрачность Механическая Стойкость Химическая
по отношению прочность к электронной стойкость
к электронам бомбардировке
Коллодиевая Большая Низкая Низкая Низкая
Углеродная Средняя Высокая Высокая Очень высокая
Кварцевая Малая Средняя Средняя Высокая
Коллодиевые пленки-подложки просты в изготовлении. Чтобы их получить, пользуются 0,5—2%-ным раствором коллодия в амилацетате. Каплю такого раствора наносят на поверхность воды, налитой в чашку диаметром около 20 см (рис. 1). Капля быстро растекается, и после испарения амилацетата образуется тонкая пленка. Уровень воды в чашке постепенно понижают, и пленка опускается на пластинку с сеточками, помещенную на дне
сосуда. Известны и другие способы изготовления коллодиевой пленки [10]. Пленки из формвара получить труднее, так как его растворители (диоксан, дихлорэтан, хлороформ) не растекаются по поверхности воды. В этом случае каплю 0,1— 0,2%-ного раствора наносят на край чистой стеклянной пластинки и дают ей возможность растечься по всей поверхности. Отделить образовавшуюся пленку от стекла можно в воде [10].
Углеродные, кварцевые пленки и пленки из окиси кремния получают испарением соответствующих материалов в вакууме. Наибольшими преимуществами обладают углеродные пленки.
Техника изготовления проста и имеет много общего с изготовлением углеродных реплик.
Предыдущая << 1 .. 22 23 24 25 26 27 < 28 > 29 30 31 32 33 34 .. 133 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed