Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Лазуркина Ю.С. -> "Физические методы исследования белков и нуклеиновых кислот" -> 110

Физические методы исследования белков и нуклеиновых кислот - Лазуркина Ю.С.

Лазуркина Ю.С. Физические методы исследования белков и нуклеиновых кислот — Наука, 1967. — 343 c.
Скачать (прямая ссылка): fizmetodiisledovaniyabelkov1967.djvu
Предыдущая << 1 .. 104 105 106 107 108 109 < 110 > 111 112 113 114 115 116 .. 133 >> Следующая

хД
Расстояние от оси вращения ротора
Рис. 28. Распределение градиента Рис. 29. Схематическое изображение
концентрации и концентрации . в производной концентрации и концентра-
кювете во время приближения к дии раствора при наслоении раствори*
равновесию (метод Арчибальда)4 теля на раствор в ячейке для получе-
ния искусственной границы
учетом коэффициентов увеличения оптической системы равна начальной концентрации с0. Определение начальной концентрации должно выполняться в тех же условиях, при которых производится опыт для нахождения распределения концентрации. Расчет требует графического интегрирования [45].
Имеются модификации метода Арчибальда [46, 47], в частности вариант, предложенный Эренбергом, упрощающий процедуру расчета, [47]. В этом случае определяется величина s/D согласно уравнению
(-)
\ dx L
s/D =---------^----, (32)
<**хм(А8-А)К
где —ордината градиентной кривой на линии мениска; хм —
\йх)м
расстояние от оси вращения ротора до линии мениска; К—величина,
обратная фактору увеличения системы по оси х; As — площадь пика на снимке, полученном в ячейке с искусственной границей; Л—площадь, ограниченная линией мениска, базовой линией и градиентной кривой в опыте приближения к седиментационному равновесию.
Величина As так же, как и в методе Арчибальда, определяется из независимого опыта с искусственной границей. Молекулярный вес определяют, комбинируя уравнение (19) и выражение (32). Метод Арчибальда и его модификации в настоящее время широко применяются в практике определения молекулярных весов белков и синтетических полипептидов. Несмотря на меньшую точность определения молекулярного веса по сравнению с методом седиментационного равновесия, метод Арчибальда привлекателен быстротой проведения опыта, что является существенным при работе с быстро деградирующими препаратами.
При длительном ультрацентрифугировании концентрированных солевых растворов в кювете устанавливается стационарное распреде-
dPp
ление плотности, которое характеризуется градиентом —-, где рр—
плотность растворителя в данной точке кюветы, находящейся на расстоянии лс от оси вращения ротора. Возникновение градиента обусловлено перераспределением концентрации соли при ультрацентрифугировании. Величина установившегося перепада плотности в данной точке кюветы относительно мениска раствора или дна кюветы зависит от состава растворителя, температуры, угловой скорости и расстояния от оси вращения.
Если макромолекулы исследуемого вещества находятся в таком концентрированном солевом растворе, то в соответствии с' выражением (19) они имеют коэффициент седиментации s~( 1—Vpp). Это означает, что в тех областях кюветы, где Vpp<^l> вещество седи-
ментирует; в области, где Vpp^> 1, вещество движется против центробежного поля (коэффициент седиментации имеет отрицательный знак). В результате вещество, локализуется в той области кюветы, где
ТакиМ образом, если в концентрированном солевом растворе в начальный момент времени растворенное вещество было распределено по объему равномерно, то с установлением градиента плотности вещество после достижения равновесия сосредоточивается в узкой полосе, плотность в которой равна плотности исследуемой макромолекулы (рис. 30).
е. Равновесная седиментация в установившемся градиенте плотности
dx
плотность раствора равна плотности макромолекулы
Плотность CsCl, г (мл
Гомогенное вещество при этом локализуется в полосе определенной ширины, что обусловлено тепловым движением макромолекул (броуновское движение). Полидисперсность по молекулярному весу вызывает дополнительное симметричное расширение полосы, полидисперсность по плотности вызывает обычно асимметричное расширение полосы, как это показано на рис. 31 для ДНК тимуса теленка.
CsCl,%
-Stf
б I
/ - 20 \
Л/ id
\У =С
§
А - 10 1
1 !
1
о ^
7 и
Расстояние от оси вращения, см
Рис. 30. Распределение плотности CsCl и концентрации ДНК до начала опыта (а) и после установления градиента плотности (б)
Рис. 31. Распределение концентрации ДНК тимуса теленка в CsCl после достижения равновесия. Асимметричность полосы свидетельствует о поли-дисперсности плотности
Распределение концентрации гомогенного вещества в зоне его локализации является гауссовым и имеет вид:
с = с0е 2а\ (33)
где х — расстояние от любой точки полосы до ее центра; о — дисперсия гауссова распределения, характеризующая ширину полосы, с0—-концентрация вещества в центре полосы.
Предыдущая << 1 .. 104 105 106 107 108 109 < 110 > 111 112 113 114 115 116 .. 133 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed