Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Кульберг А.Я. -> "Биохимия мембран. Рецепторы клеточных мембран. Том 4" -> 39

Биохимия мембран. Рецепторы клеточных мембран. Том 4 - Кульберг А.Я.

Кульберг А.Я. Биохимия мембран. Рецепторы клеточных мембран. Том 4 — М.: Высшая школа, 1987. — 103 c.
Скачать (прямая ссылка): receptorikletochnihmembrant41987.djvu
Предыдущая << 1 .. 33 34 35 36 37 38 < 39 > 40 41 42 43 44 45 .. 46 >> Следующая

биосинтеза покоящимися макрофагами Clq-компонента комплемента. Опыты
выполняли in vitro в среде 199, не содержащей сыворотки крови, что
позволяло исключить влияние не поддающихся точной оценке сывороточных
факторов. Источником глицина служил 14С-глицин.
На рис. 21 представлены данные о накоплении в клетках и среде меченого
Clq при культивировании макрофагов в среде с радиоактивной аминокислотой.
Максимальное содержание меченого Clq в среде наблюдается к 72 ч.
Уменьшение фиксируемого на иммуносорбенте внеклеточного Clq к 96 ч можно
объяснить его протеолитическим расщеплением под действием высвободившихся
из клеток протеиназ.
Как известно, макрофаги экспрессируют рецептор для Clq (см. гл. 3 и 5).
Активный центр этого рецептора содержит структуры, являющиеся
детерминантами для антител против антител к Clq (см. разд. 3.2).
Моновалентные Fab-фрагменты указанных антиидиотипических антител
блокируют активный центр рецептора для Clq, эффективно конкурируя с
последним. Это определяет возможность использования Fab-фрагментов
антиидиотипических антител для оценки роли рецептора в регуляции
биосинтеза белка, распознаваемого этим рецептором. Как показали
выполненные эксперименты (А. Я. Кульберг и др., 1986), добавление в среду
Fab-фрагментов антител против антител к Clq приводит к подавлению
биосинтеза Clq покоящимися перитонеальными макрофагами (рис. 22).
Одновременно в этих же условиях был исследован биосинтез других белков,
продуцируемых макрофагами. Для этого с помощью иммобилизованных антител
из препаратов извлекали Clq, а остальные белки (как внутриклеточные, так
и присутствующие в культуральной жидкости) осаждали трихлоруксусной
кислотой и определяли их радиоактивность. Оказалось, что в присутствии
Fab-фрагментов антиидиотипических антител биосинтез водорастворимых
белков макрофага (за исключением Clq) не изменяется. Таким образом,
избирательное блокирование активного центра рецептора для Clq
сопровождается подавлением биосинтеза только Clq.
ic
д S
н о
О -
0 *
1 -е
= 2 iZ • 1C
я
С X * 1
Время, ч
Рис. 21. Изменение содержания новообразованного Clq-компонента
комплемента в экстракте перитонеальных макрофагов (/) и в культуральной
жидкости при культивировании клеток in vitro (2)
88
Поскольку остаточный синтез Clq макрофагами, культивируемыми в среде,
которая содержит Fab-фрагменты анти-идиотипических антител, носил
конститутивный (постоянный) характер (рис. 22), было сделано заключение,
что блокирование активного центра рецептора для Clq строго избирательно
подавляет процесс ин-дуцибельного синтеза Clq макрофагами (А. Я. Кульберг
и др., 1986).
Выше были представлены данные, согласно которым биосинтез Clq
культивируемыми макрофагами in vitro, затормаживается после 48 ч без
каких-либо внешних воздействий на клетки (см. рис. 21). Это может
означать, что в среде накапливается фактор, способный блокировать
рецептор для Clq и тем самым влиять на биосинтез этого белка. Для того
чтобы проверить это предположение, сравнивали между собой скорость
биосинтеза Clq на разных сроках культивирования клеток и экспрессию
клеточных рецепторов для Clq. Меченый глицин добавляли за 2 ч до
определения новообразованного Clq; об экспрессии рецепторов судили по
связыванию меченого Clq макрофагами.
Из рис. 23 следует, что скорость биосинтеза Clq в процессе
культивирования клеток непостоянна. Она существенно снижается к 48 ч, а
затем постепенно восстанавливается к 96 ч. Экспрессия рецепторов для Clq
на поверхности макрофагов также претерпевает изменения; их динамика
практически повторяет динамику биосинтеза Clq. Обращает на себя внимание
также и тот факт, что восстановление скорости биосинтеза Clq к 96 ч, как
и восстановление к этому периоду начального уровня экспрессии рецепторов
для этого белка, происходит на фоне снижения в культуральной жидкости Clq
(см. рис. 21). Иными словами, биосинтез Clq находится в прямой
зависимости от экспрессии макрофагами рецепторов этого белка и в обратной
зависимости ит"Содержания Clq во внешней среде (АТЯГКуль-берг и др.,
1987Д ' ' *
Если принять, что ключевым фактором в регуляции биосинтеза того или иного
белка служит степень экспрессии рецепторов этого белка, то основное
внимание следует сосредоточить на поиске эндогенных причин, влияющих на
экспрессию рецептора
Рис. 22. Влияние антител против антител к Clq (Fab-фрагменты) на
биосинтез Clq культивируемыми in vitro перитонеальными макрофагами:
I, ¦? -биосинтез внутриклеточного Clq без добавления Fab-фрагмента и в
его присутствии, 2. 4 - то же, для новообразованного внеклеточного Clq
89
(доступность его активного центра для лиганда). Прежде всего необходимо
учитывать возможность блокирования активного центра рецептора
новообразованным белком (специфическим для рецептора лигандом^,
накапливающимся вне клетки. Это предположение не находит прямого
подтверждения при изучении процесса регуляции биосинтеза Clq макрофагами.
Предыдущая << 1 .. 33 34 35 36 37 38 < 39 > 40 41 42 43 44 45 .. 46 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed