Жизненные процессы и гидростатическое давление - Крисс А.Е.
Скачать (прямая ссылка):
мин. под давлением 5000 атм, в суспензией бактерий, нагревавшейся 1 час
при 57° и атмосферном давлении-контроль
(Vlgnals et al.< 1953)
Вакцина Кролики До иммунизации После начала иммунизации через:
4 дня 16 дней 30 дней
О II Vi О Н Vi О н Vi О Н Vi
Нагревавшаяся 1 25 <25 <25 40 40 20 2560 1280 640 2560 640
160
(контроль) 2 25 <25 <25 50 50 50 2560 2560 20 2560 640
20
3 25 <25 <25 25G0 640 320 1280 640
320
4 25 <25 <25 40 40 20 10240 1280 320 1280 640
640
Средний 25 <25 <25 40 40 20 4480 1500 325 1280 640
285
титр
Подвергнутая 5 25 <25 <25 320 20 20 320 20 2560 40 20
640
давлению 6 25 <25 <25 320 20 20 10240 20 5120 2560 20
1280
7 25 <25 <25 160 20 20 5120 20 5120 1280 20
1280
Средний 25 <25 <25 270 20 20 5230 20 4300 1300 20
1070
титр
Примечание: Для реакций агглютинации использовали
суспензии клеток Salmonella paratyphi С и Е. coli, содержащие
антигены О, Н, Vi.
В другой серии экспериментов, где применяли давление 5000 атм в
течение 30 мин., антиген Н был полностью инактивирован, судя по
отсутствию антител в сыворотке кроликов через месяц после начала
иммунизации их суспензией бактерий, пробывших под этим давлением. В
контроле агглютинационный титр сыворотки был относительно высоким. Что же
касается антигена О, то он дал одинаковый и самый высокий титр
агглютининов в сыворотках, полученных от иммунизации животных суспензией
бактерий из-под давления и нагретой вакциной. С антигеном Vi были
достигнуты в этой серии те же результаты, что и в опытах с давлением 1500
атм - значительно больший титр, чем в контроле (табл. 4).
Сравнительная устойчивость антигена Vi привела Vignais, Lecomte et
Macheboeuf (1953) к дополнительным опытам. Суспензию клеток Salmonella
paratyphi С помещали под давление 300 атм на 5 мин. После снятия давления
бактерии переносили в бульон, где они размножались в условиях
атмосферного давления, а оттуда - на твердую питательную среду для
получения колоний. Из колоний готовили суспензию бактерий, которая в свою
очередь подвергалась давлению 3000 атм в течение 5 мин. Из этой суспензии
вновь получали культуру бактерий, их помещали под давление, и такая
процедура повторялась многократно. Авторы сообщают, что с каждым пассажем
при указанном давлении антиген Vi становился все слабее, что выражалось в
уменьшении агглютинирующей силы сыворотки к нему. Пассажи при одной
атмосфере в какой-то мере восстанавливали антиген Vi, но это
восстановление происходило полнее, например, после седьмого пассажа через
высокое давление, чем после десятого.
Изменения антигена Vi в бактериальных клетках были одинаковыми во всех
колониях, выросших из каждого пересева. Более того, исследования
отдельных участков колоний убедили авторов в том, что внутри колонии
диссоциация по антигенным свойствам бактерий не происходила.
ТЕПЛОВАЯ ДЕНАТУРАЦИЯ БЕЛКА
ПОД ВЫСОКИМ ДАВЛЕНИЕМ
При одновременном действии на белок нагревания и высокого давления в
определенных пределах наблюдается задерживающее тепловую денатурацию
влияние высокого давления.
Количественные определения показали (Johnson, Campbell, 1946), что
раствор сывороточного глобулина, нагревавшийся в течение двух часов при
температуре 65° и высоком давлении, противостоял денатурирующему действию
температуры значительно лучше, чем при атмосферном давлении. В то время
как при одной атмосфере в конце опыта в растворе оставалось только около
25% белка, под давлением 7500 ф/д2 примерно такой же
процент характеризовал количество выпавшего в осадок глобулина- остальная
часть сохранялась в растворенном состоянии *.
' Эффект тепловой денатурации белка повышался при более низком
давлении - 5000, 3000, 1500 ф/д2 (рис. 9).
Обращает на себя внимание почти полная задержка процесса тепловой
денатурация раствора глобулина под давлением 7500 ф/д2. При меньших
давлениях она отсутствовала, наблюдалось лишь замедление скорости
выпадения коагулята в этот период времени. Авторы объясняют данное
явление двумя возможными причинами - гетерогенностью белковых молекул или
(и) сложностью реакций у гомогенных молекул. Величина эффекта давления
указывает на то, что увеличение объема в денатура-ционном процессе
составляет 100 мл на моль белка.
Задерживающее действие высокого давления наблюдалось и в опытах, когда
на сывороточный глобулин одновременно действовали два денатурирующих
агента - температура и алкоголь. Прибавление этилового спирта повышало
скорость денатурации, однако давление 10 000 ф/д2 заметно ингибировало
