Жизненные процессы и гидростатическое давление - Крисс А.Е.
Скачать (прямая ссылка):
трипсином резко отличался от денатурированного сывороточного альбумина,
приближаясь по этим свойствам к исходному белку. Ренатурация
сывороточного альбумина, в отличие от яичного белка, происходила даже в
том случае, когда альбумин помещали под давление спустя продолжительное
время после тепловой денатурации.
Интересно то обстоятельство, что ренатурированный белок, подвергнутый
повторной коагуляции нагреванием, вновь восстанавливал свою растворимость
под давлением, однако некоторая часть его денатурировалась необратимо
(рис. 12).
Дальнейшее определение свойств ренатурированного сывороточного
альбумина показало, что давление восстанавливает его антигенную
специфичность и активность. В сравнительных опытах по преципитации с
сыворотками, полученными от иммунизации нативным, денатурированным и
ренатурированным белками, выяснилось, что максимальные разведения
иммунных сывороток, при которых еще наблюдалась преципитация с нативным и
ренатурированным белками, совпадали (см. выше).
Привлекает внимание тот факт, что давление не способно ренатурировать
сывороточный альбумин после денатурации его светом и мочевиной: очевидно,
действие этих факторов отлично от денатурирующего действия нагрева.
Ренатурация под давлением была достигнута не только в опытах с яичным
белком и сывороточным альбумином, но и в опытах с кональбумином,
овальбумином, ^-глобулином, химотрип-сином и инсулином. Тонгур и
Касаточкин (1954) отмечают, что
давление способствует ускоренному и более полному по сравнению со
спонтанной ренатурацией восстановлению активности у денатурированного
теплом химотрипсина. Что же касается инсулина, то регенерация его
активности давлением после денатурации происходила и в том случае, когда
давление пе приводило к исходной вязкости раствора этого фермента.
Не только животные, но и растительные белки можно ренатурировать
высоким давлением после тепловой денатурации (Орлова и др., 1954). В
опытах с глиадином, белком, содержащимся в семенах злаков,
денатурированный нагреванием при различных температурах белок
восстанавливал растворимость в результате пребывания под давлением 2000
атм в течение 20 мин., но не полностью. По этому свойству
регенерированный глиадин занимал промежуточное место между нативным и
коагулированным белком.
По другим признакам ренатурированный белок отличался также от
денатурированного и исходного: по вязкости, углу вращения плоскости
поляризации и перевариваемости трипсином. Наименьшие различия с нативным
белком и наибольшие с денатурированным у регенерированного глиадина были
по углу вращения плоскости поляризации, затем - перевариваемости и на
последнем месте - по вязкости.
Авторы указывают, что с повышением температуры нагревания и
увеличением его продолжительности резко возрастала степень денатурации
глиадина, а также усиливалась регенерируе-мость этого белка под действием
высокого давления, но в меньшей степени.
Ренатурация ^-глобулина, денатурированного нагреванием при 70° в
течение 5 мин. и атмосферном давлении или давлением 5000, 5500 атм,
продолжительностью 5 мин. при 30°, была
1 - нагревание;
2 - давление
Рис. 12. Многократная тепловая денатурация и ренатурация сывороточного
альбумина под давлением 2000 атм (Тонгур, Казьмина, 1950)
О Ю ZD 30 40 50 Часы
достигнута Suzuki К. a. Miyosawa (1965). Денатурированный нагреванием
глобулин не изменился при атмосферном давлении и температуре 3 и 30° в
течение 60 час. опыта. Лишь под давлением 800 атм и 30° наблюдалось
примерно через трое суток снижение процента коагулированного белка
наполовину.
В опытах с белком, коагулированным высоким давлением, уже через час
после применения давления 800 атм при 30° процент коагулированного
альбумина снизился с 68 до 9,3. В условиях атмосферного давления
ренатурация не происходила даже через сутки, если температура была 3°;
при 30° и 1 атм часть коагулята перешла в растворимое состояние (табл.
8). Повышение давления с 800 до 1200 атм для ренатурации глобулина,
Таблица 8. Ренатурация v-глобулина, денатурированного высоким давлением и
нагреванием (Suzuki К., Miyosawa, 19G5)
Коагулированный белок, %
Условия денатурации ренатура
ции 0 час. 1 час. 4 часа 8 час.
26 час.
Давление 5000 атм, 5 мин.. 30° 1 атм, 3° 45 _ 43 45
44
1 атм, 30° 45 --- 39 ---
30
Давление 5500 атм, 5 мин.. 30° 1 атм, 30е 68 9.3 --- ---
---
0 час. 38 час. 68 часа -
-
Нагревание 70°, 5 мин., 1 атм, 3° 61 61 _ __
_
1 атм. 1 атм, 30° 61 --- 61 -
-
800 атм, 30° 61 54 32 -
